目的:研究蠲痹歷節(jié)清方對(duì)痛風(fēng)作用及對(duì)TLR4/NF-κB信號(hào)通路主要元件的影響。方法:實(shí)驗(yàn)分為兩部分,①不添加TLR4受體抑制劑部分;②添加TLR4受體抑制劑部分。每部分利用單鈉尿酸鹽（MSU）結(jié)晶誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生痛風(fēng)模型,隨機(jī)分正常對(duì)照組、模型組、蠲痹歷節(jié)清方組,并分別干預(yù)。用Westen-blot法測(cè)定干預(yù)后巨噬細(xì)胞中髓樣分化分子88（MyD88）、IκB激酶-β（IKK-β）、NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）蛋白表達(dá),RT-PCR測(cè)定干預(yù)后各組巨噬細(xì)胞中Toll樣受體4（TLR4）基因表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)巨噬細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子kappa B（NF-κB）核移位情況;ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。結(jié)果:不添加TLR4受體抑制劑部分:與正常對(duì)照組相比,模型組MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表達(dá)含量明顯升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明顯升高;IκB-α蛋白明顯降低。與模型組比較,蠲痹歷節(jié)清方組中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表達(dá)含量明顯降低;TNF-α、IL-6、IL-... 

【文章來(lái)源】：中藥藥理與臨床. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞中TLＲ4mＲNA相對(duì)表達(dá)1:空白對(duì)照;2:

n=10)組別劑量/(g/kg)未添加受體抑制劑添加受體抑制劑正常對(duì)照--0．72±0．030．84±0．05＊△模型對(duì)照--1．84±0．111．61±0．06△蠲痹歷節(jié)清方440．92±0．04*0．80±0．07＊△表7蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞中IκB-α蛋白的相對(duì)IOD的影響(x珋±s，n=10)組別劑量(g/kg)未添加受體抑制劑部分添加受體抑制劑部分正常對(duì)照--1．04±0．07*1．77±0．11△模型對(duì)照--0．88±0．031．35±0．09△蠲痹歷節(jié)清方440．95±0．04*1．59±0．16＊△圖6蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞β-actin蛋白表達(dá)的影響(×200)中藥藥理與臨床2019;35(1)751

圖7蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞MyD88蛋白表達(dá)的影響(×200)圖8蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞IKK-β蛋白表達(dá)的影響(×200)1、2、3為未添加TLＲ受體抑制劑實(shí)驗(yàn)部分:1:空白對(duì)照;2:模型對(duì)照;3:蠲痹歷節(jié)清方44g/kg;4、5、6為添加TLＲ受體抑制劑實(shí)驗(yàn)部分:5:空白對(duì)照;6:模型對(duì)照;7:蠲痹歷節(jié)清方44g/kg。圖9蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞IκB-α蛋白表達(dá)的影響(×200)2．4NF-κB核移位情況正常培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞NF-κB主要表達(dá)在細(xì)胞漿，鏡下呈紅色熒光，核表達(dá)很少，而模型組紅色熒光主要表達(dá)于細(xì)胞核，胞漿表達(dá)明顯減少［8，9］。從圖10、11可以看出，兩部分實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，經(jīng)免疫熒光染色檢測(cè)，正常對(duì)照組中NF-κB主要集中在細(xì)胞漿，細(xì)胞核中表達(dá)較少;模型組中NF-KB蛋白表達(dá)呈猩紅色明顯增強(qiáng)，主要集中在細(xì)胞核中，細(xì)胞漿中較少，表明NF-κB核移位明顯;蠲痹歷節(jié)清方組NF-κB主要在細(xì)胞漿中，細(xì)胞核中相對(duì)較少，未出現(xiàn)明顯NF-κB核移位情況。加入TLＲ4受體抑制劑部分，各組巨噬細(xì)胞NF-κB表達(dá)明顯受到抑制。說(shuō)明蠲痹歷節(jié)清方可抑制NF-κB核移位。TＲITC和DAPI合成圖，紅色代表NF-κBp65表達(dá)，藍(lán)色代表細(xì)胞核(下同)。圖10蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞中NF-κB核移位的影響(未添加TLＲ4阻斷劑部分，×200)圖11蠲痹歷節(jié)清13．6%含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞中NF-κB核移位的影響(添加TLＲ4阻斷劑部分，×200)3討論隨著人民生活水平的提高及飲食結(jié)構(gòu)改變，痛風(fēng)在我國(guó)的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)［10，11］。痛風(fēng)一旦發(fā)?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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