旋毛蟲5日齡成蟲期特異性基因的克隆與表達
發(fā)布時間:2021-06-19 21:44
旋毛蟲病是一種嚴(yán)重的人獸共患病,可感染人及150多種動物,呈世界性分布。近年來在我國17個省、市、自治區(qū)發(fā)現(xiàn)有多起人體感染的暴發(fā)流行。河南省為我國旋毛蟲病高發(fā)區(qū)之一,僅鄭州市已發(fā)生7次暴發(fā)流行,發(fā)病400多人。若不及時診斷和治療,患者死亡率可高達3%~30%。因而旋毛蟲成為我國肉食品衛(wèi)生檢驗中的首檢寄生蟲,開展旋毛蟲病的預(yù)防和控制工作在我國更具緊迫性和重要性,而預(yù)防和控制旋毛蟲病的關(guān)鍵在于建立一套快速、簡便、特異性高的檢測手段以及采取各種有效預(yù)防措施降低動物感染率。 目前對旋毛蟲病尚無滿意的診斷方法,病原學(xué)檢查檢出率低且不易為患者接受。國內(nèi)外學(xué)者對旋毛蟲病的免疫學(xué)診斷進行了大量的研究,但所用的診斷抗原多為旋毛蟲肌幼蟲蟲體粗抗原,由于抗原成分復(fù)雜,用于本病的免疫學(xué)診斷時常與其它寄生蟲病發(fā)生交叉反應(yīng)而出現(xiàn)假陽性。 對旋毛蟲病的免疫預(yù)防的研究表明,由于旋毛蟲在不同的發(fā)育期蟲體抗原組分存在明顯的差異且同一期蟲體抗原結(jié)構(gòu)也極其復(fù)雜,且在其長期的寄生生活中,逐漸形成了免疫逃避機制,目前采用成份復(fù)雜的蟲體抗原往往難以取得理想的免疫預(yù)防效果且極不穩(wěn)定,而且旋毛蟲的體外培養(yǎng)仍未取得突破,這都...
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
ADS期特異性T
0.4kb一1.skb左右片段(見圖3)。取1號、3號克隆切割獲得噬菌體質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染XLOLR宿主菌后,用通用測序引物T3、T7兩端測序,結(jié)果顯示3號克隆插入片段全長1132個堿基,插入片段位于ECoR工和Xhol之間,為一完整全長基因,其ORF位于2一1031bp之間,編碼343個氨基酸、分子量為35.IkDa的多膚分子,測序及其編碼氨基酸序列結(jié)果見圖4。InterProSCan分析顯示氨基
鄭州口冤學(xué)2002年祠可士論文旋毛蟲5日齡成蟲期特異性堵‘因的分子克隆與表達門面面面面面面面面面面面面面面面DHSQ宿主菌后,長出50多個菌落,經(jīng)kan+平板篩選,裂解液快速鑒定后,初步篩出6個菌落。任挑取1個篩出的菌落,小提質(zhì)粒,BamH工和Xho工雙酶切鑒定,應(yīng)產(chǎn)生1164bp、5329bp片段。用Smal酶切應(yīng)產(chǎn)生2387bp、4lO6bp片段。對照pET28a空載體用BamHI和Xhol雙酶切,應(yīng)產(chǎn)生5329bp片段。酶切鑒定結(jié)果見圖10,與預(yù)期結(jié)果相符。
【參考文獻】:
期刊論文
[1]旋毛蟲5日齡成蟲期特異性基因片段的克隆及鑒定[J]. 付寶權(quán),劉明遠,王鋒,吳秀萍,盧強,黎誠耀,竇蘭清,P.Boireau. 中國獸醫(yī)科技. 2001(11)
[2]旋毛蟲新生幼蟲cDNA文庫的構(gòu)建[J]. 劉明遠,付寶權(quán),盧強,吳秀萍,姚春雨,宇麗,竇蘭清,P.Boireau. 中國獸醫(yī)科技. 2001(03)
[3]我國旋毛蟲病流行病學(xué)概況與研究前瞻[J]. 劉明遠. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1998(S2)
[4]中國旋毛蟲分離株成蟲和新生幼蟲基因文庫的構(gòu)建及篩選[J]. 劉明遠,徐克誠,黎誠耀,柳增善,孫遠濤,趙君,鄭明光. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 1998(02)
[5]旋毛蟲肌幼蟲ES抗原特異性蛋白2個結(jié)構(gòu)基因的分子克隆及其高效表達[J]. 閻玉河,童光志,盧景良. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 1997(06)
[6]旋毛蟲cDNA文庫的構(gòu)建[J]. 雷莉,翟朝陽,田玉,陳盛文. 實用寄生蟲病雜志. 1997(01)
[7]湖北省人群旋毛蟲病流行狀況分析[J]. 吳熾煦,董俊美,葉建君. 中國寄生蟲病防治雜志. 1996(04)
[8]云南邊疆民族地區(qū)主要人獸共患寄生蟲分類與流行病學(xué)研究[J]. 黃德生,解天珍,郭正,楊榮麗. 中國獸醫(yī)寄生蟲病. 1996(03)
[9]旋毛蟲肌幼蟲ES抗原的基因克隆及高效表達[J]. 閻玉河,許威光,陳輝,馬增全,朱元曉,蔡仕英. 生物工程學(xué)報. 1994(01)
[10]旋毛蟲成蟲可溶性粗抗原對小鼠的免疫保護作用[J]. 朱興全,史曉紅,竇蘭清,孫學(xué)勤,牛炳亨,石磊,楊書軍. 中國人獸共患病雜志. 1992(05)
本文編號:3238597
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
ADS期特異性T
0.4kb一1.skb左右片段(見圖3)。取1號、3號克隆切割獲得噬菌體質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染XLOLR宿主菌后,用通用測序引物T3、T7兩端測序,結(jié)果顯示3號克隆插入片段全長1132個堿基,插入片段位于ECoR工和Xhol之間,為一完整全長基因,其ORF位于2一1031bp之間,編碼343個氨基酸、分子量為35.IkDa的多膚分子,測序及其編碼氨基酸序列結(jié)果見圖4。InterProSCan分析顯示氨基
鄭州口冤學(xué)2002年祠可士論文旋毛蟲5日齡成蟲期特異性堵‘因的分子克隆與表達門面面面面面面面面面面面面面面面DHSQ宿主菌后,長出50多個菌落,經(jīng)kan+平板篩選,裂解液快速鑒定后,初步篩出6個菌落。任挑取1個篩出的菌落,小提質(zhì)粒,BamH工和Xho工雙酶切鑒定,應(yīng)產(chǎn)生1164bp、5329bp片段。用Smal酶切應(yīng)產(chǎn)生2387bp、4lO6bp片段。對照pET28a空載體用BamHI和Xhol雙酶切,應(yīng)產(chǎn)生5329bp片段。酶切鑒定結(jié)果見圖10,與預(yù)期結(jié)果相符。
【參考文獻】:
期刊論文
[1]旋毛蟲5日齡成蟲期特異性基因片段的克隆及鑒定[J]. 付寶權(quán),劉明遠,王鋒,吳秀萍,盧強,黎誠耀,竇蘭清,P.Boireau. 中國獸醫(yī)科技. 2001(11)
[2]旋毛蟲新生幼蟲cDNA文庫的構(gòu)建[J]. 劉明遠,付寶權(quán),盧強,吳秀萍,姚春雨,宇麗,竇蘭清,P.Boireau. 中國獸醫(yī)科技. 2001(03)
[3]我國旋毛蟲病流行病學(xué)概況與研究前瞻[J]. 劉明遠. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1998(S2)
[4]中國旋毛蟲分離株成蟲和新生幼蟲基因文庫的構(gòu)建及篩選[J]. 劉明遠,徐克誠,黎誠耀,柳增善,孫遠濤,趙君,鄭明光. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 1998(02)
[5]旋毛蟲肌幼蟲ES抗原特異性蛋白2個結(jié)構(gòu)基因的分子克隆及其高效表達[J]. 閻玉河,童光志,盧景良. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 1997(06)
[6]旋毛蟲cDNA文庫的構(gòu)建[J]. 雷莉,翟朝陽,田玉,陳盛文. 實用寄生蟲病雜志. 1997(01)
[7]湖北省人群旋毛蟲病流行狀況分析[J]. 吳熾煦,董俊美,葉建君. 中國寄生蟲病防治雜志. 1996(04)
[8]云南邊疆民族地區(qū)主要人獸共患寄生蟲分類與流行病學(xué)研究[J]. 黃德生,解天珍,郭正,楊榮麗. 中國獸醫(yī)寄生蟲病. 1996(03)
[9]旋毛蟲肌幼蟲ES抗原的基因克隆及高效表達[J]. 閻玉河,許威光,陳輝,馬增全,朱元曉,蔡仕英. 生物工程學(xué)報. 1994(01)
[10]旋毛蟲成蟲可溶性粗抗原對小鼠的免疫保護作用[J]. 朱興全,史曉紅,竇蘭清,孫學(xué)勤,牛炳亨,石磊,楊書軍. 中國人獸共患病雜志. 1992(05)
本文編號:3238597
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