目的研究初級纖毛在肺內(nèi)皮細(xì)胞抗缺氧損傷中的作用及機(jī)制。方法將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PMVEC）培養(yǎng)至接近融合時,置于密閉缺氧盒中處理0、6、12、18和24h,觀察處理不同時間后的細(xì)胞形態(tài)和初級纖毛長度的變化。用RNA干擾法（siRNA）抑制IFT-88的表達(dá)以觀察PMVEC初級纖毛的發(fā)生情況,同時以無意義干擾序列作為陰性對照組（對照組）。將對照組和siRNA組同時置于缺氧環(huán)境0、6、12、18和24 h,檢測各時間點(diǎn)的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）含量,谷胱甘肽氧化物酶（GSP-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性。結(jié)果缺氧導(dǎo)致PMVEC細(xì)胞受損,且初級纖毛長度較常氧環(huán)境下顯著增加（P<0.01）。IFT88表達(dá)被干擾后PMVEC的初級纖毛發(fā)生受抑制。對照組PMVEC的ROS、MDA水平在缺氧后逐漸升高,12 h時達(dá)到峰值,之后開始下降,24 h后又略有回升;GSH-PX和SOD活性逐漸升高,至12 h時達(dá)到峰值,之后持續(xù)下降（P<0.01）。siRNA組的ROS和MDA水平隨著缺氧時間的延長持續(xù)升高,GSH-PX和SOD活性無明顯變化。結(jié)論纖毛參與了胞外缺氧及氧化脅迫信... 

【文章來源】：解放軍醫(yī)藥雜志. 2019,31(05)

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不同時間缺氧后肺內(nèi)皮細(xì)胞株P(guān)MVEC的形態(tài)學(xué)變化(SP×4)ABCDE

皮細(xì)胞株P(guān)MVEC的形態(tài)學(xué)變化(SP×4)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h2.2PMVEC初級纖毛在缺氧環(huán)境的變化PM-VEC初級纖毛在常氧環(huán)境的長度為(1．55±0．44)μm，(見圖2A);但在缺氧環(huán)境其長度顯著增加，缺氧18h時達(dá)到高峰，長度為(4．52±1．04)μm(P＜0.01)，(見圖2B～2D);但在缺氧24h后其長度又略微變短，下降至(3．61±1．22)μm，(見圖2E);仍顯著長于常氧環(huán)境(P＜0.01)。見圖3。ABCDE圖2不同時間缺氧后PMVEC細(xì)胞初級纖毛長度(免疫熒光×40)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h·11·

6543210初級纖毛長度(um)b0%612%18%24缺氧處理時間(h)bbb圖3不同時間缺氧后PMVEC細(xì)胞的初級纖毛長度變化與缺氧0h時比較，bP＜0.012.3干擾IFT88基因表達(dá)對初級纖毛發(fā)生的影響siRNA組和陰性組的細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功率(成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞顯示綠色熒光)均在70%以上(見圖4)。轉(zhuǎn)染24h后，siRNA組IFT88的mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量顯著低于對照組(P＜0.05)(圖5A、5B)，siRNA組細(xì)胞的初級纖毛消失(見圖6)。對照組siRNA組圖4重組質(zhì)粒對PMVEC細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率(免疫熒光×4)2.4初級纖毛對PMVEC氧化指標(biāo)的影響對照組MDA含量隨缺氧時間的延長而升高，至12h時達(dá)高峰(P＜0.01)，之后開始下降，18、24h后的MDA含量均低于12h，24h的含量略高于18h(見圖7A)。活性氧(ROS)水平呈相同的變化趨勢，即缺氧12h后達(dá)到最高水平，之后趨于下降，雖然24h后略有回升，但仍低于12h(圖7B)。siRNA組的MDA含量在0、6、12h與對照組相同，但之后持續(xù)增加，至24h達(dá)到最高水平，并在18h后顯著高于對照組(P＜0.01)。ROS水平的變化與MDA相同，雖然在0、6、12h與對照組處于同一水平，之后持續(xù)上升，至18h顯著高于對照組(P＜0.01)，24h達(dá)到最高值。2.5初級纖毛對PMVEC抗氧化指標(biāo)的影響，對照組SOD和GSH-PX缺氧后酶活性逐漸增加，至12h達(dá)到峰值，之后持續(xù)下降，24h后的酶活性更低于18h，但仍顯著高于0h(P＜0.05)。siRNA組的SOD和GSH-PX活性雖然也呈現(xiàn)先增加后下降的變化趨勢，但變化幅度很小，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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