目的探究T細胞免疫球蛋白黏蛋白-3（Tim-3）對白細胞介素-2（IL-2）的調(diào)控作用及機制。方法通過酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、流式細胞術(shù)（FACS）以及實時定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法,檢測T細胞活化后,Jurkat高表達Tim-3（JurkatTim-3-high）與低表達Tim-3（JurkatTim-3-low）細胞系中IL-2的基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達水平;使用中和性抗人Tim-3抗體阻斷Jurkat細胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法檢測IL-2蛋白分泌及轉(zhuǎn)錄水平變化;通過Western蛋白免疫印跡法檢測Tim-3對IL-2表達調(diào)控相關(guān)分子[包括蛋白激酶C（PKC）β1及核因子（NF）-κB亞基P65]的磷酸化的影響。結(jié)果 ELISA、FACS和RT-PCR結(jié)果均表明,Tim-3抑制IL-2的表達,使用抗人Tim-3抗體阻斷后,IL-2的表達上調(diào);Western印跡結(jié)果顯示,與JurkatTim-3-low細胞相比,JurkatTim-3-high細胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亞基P65的磷酸化受到明顯抑制。使用中和性抗人Tim-3抗體阻斷... 

【文章來源】：軍事醫(yī)學(xué). 2019,43(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1 1.1 材料
    1 1.2 方法
        1.2.1 JurkatTim‐3‐high與JurkatTim‐3‐low細胞的體外培養(yǎng)
        1.2.2 雙抗體夾心法ELISA測定上清中IL‐2蛋白水平
        1.2.3 RNA樣品的提取及RT‐PCR檢測其IL‐2基因轉(zhuǎn)錄水平的變化
        1.2.4 Western印跡檢測不同條件處理后蛋白的磷酸化水平
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2結(jié)果
    2.1 Tim‐3抑制IL‐2基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達
    2.2 Tim‐3抗體阻斷Tim‐3對T細胞的抑制效應(yīng)
    2.3 Tim‐3可能通過抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化負調(diào)控的表達
    2.4 Tim‐3抗體通過抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化負調(diào)控IL‐2的表達
3討論



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