目的探究T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白-3（Tim-3）對(duì)白細(xì)胞介素-2（IL-2）的調(diào)控作用及機(jī)制。方法通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、流式細(xì)胞術(shù)（FACS）以及實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法,檢測(cè)T細(xì)胞活化后,Jurkat高表達(dá)Tim-3（JurkatTim-3-high）與低表達(dá)Tim-3（JurkatTim-3-low）細(xì)胞系中IL-2的基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平;使用中和性抗人Tim-3抗體阻斷Jurkat細(xì)胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法檢測(cè)IL-2蛋白分泌及轉(zhuǎn)錄水平變化;通過(guò)Western蛋白免疫印跡法檢測(cè)Tim-3對(duì)IL-2表達(dá)調(diào)控相關(guān)分子[包括蛋白激酶C（PKC）β1及核因子（NF）-κB亞基P65]的磷酸化的影響。結(jié)果 ELISA、FACS和RT-PCR結(jié)果均表明,Tim-3抑制IL-2的表達(dá),使用抗人Tim-3抗體阻斷后,IL-2的表達(dá)上調(diào);Western印跡結(jié)果顯示,與JurkatTim-3-low細(xì)胞相比,JurkatTim-3-high細(xì)胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亞基P65的磷酸化受到明顯抑制。使用中和性抗人Tim-3抗體阻斷... 

【文章來(lái)源】：軍事醫(yī)學(xué). 2019,43(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1 1.1 材料
    1 1.2 方法
        1.2.1 JurkatTim‐3‐high與JurkatTim‐3‐low細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        1.2.2 雙抗體夾心法ELISA測(cè)定上清中IL‐2蛋白水平
        1.2.3 RNA樣品的提取及RT‐PCR檢測(cè)其IL‐2基因轉(zhuǎn)錄水平的變化
        1.2.4 Western印跡檢測(cè)不同條件處理后蛋白的磷酸化水平
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2結(jié)果
    2.1 Tim‐3抑制IL‐2基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)
    2.2 Tim‐3抗體阻斷Tim‐3對(duì)T細(xì)胞的抑制效應(yīng)
    2.3 Tim‐3可能通過(guò)抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化負(fù)調(diào)控的表達(dá)
    2.4 Tim‐3抗體通過(guò)抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化負(fù)調(diào)控IL‐2的表達(dá)
3討論



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