發(fā)布時(shí)間：2021-05-25 09:14

　　目的 構(gòu)建人單純皰疹病毒1型（herpes simplex virus，HSV-1）綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）真核表達(dá)系統(tǒng)，用于HSV感染的快速診斷。 方法 提取HSV-1 DNA，利用DNA Star軟件設(shè)計(jì)對(duì)應(yīng)于HSV-1 SM44株ICP6啟動(dòng)子的PCR引物，引入BamHI和HindⅢ酶切位點(diǎn)。PCR擴(kuò)增目的基因片段，將回收純化的PCR產(chǎn)物連接至pMD18-T載體構(gòu)建亞克隆，切下目的基因，連接至真核表達(dá)載體pEGFP-1構(gòu)建重組質(zhì)粒pICP6-EGFP，經(jīng)雙酶切和DNA測(cè)序鑒定后，以陽(yáng)離子脂質(zhì)體法（Lipofectamine2000）轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48h后，加入G418（400μg／ml）篩選陽(yáng)性細(xì)胞克隆，進(jìn)行放大培養(yǎng)建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株Vero-ICP6-EGFP細(xì)胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP細(xì)胞，分別于感染后6h、8h、10h，以倒置熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光；于感染后15h以流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定GFP熒光的量和強(qiáng)度；同時(shí)以人巨細(xì)胞病毒和柯薩奇病毒檢測(cè)Vero-ICP6-EGFP細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的特異... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 目的基因的選擇及引物設(shè)計(jì)
    2.3 目的基因的獲得及純化
    2.4 載體pEGFP-1的制備
    2.5 pICP6-EGFP重組克隆的構(gòu)建
    2.6 重組質(zhì)粒pICP6-EGFP的轉(zhuǎn)染及檢測(cè)
3 結(jié)果
    3.1 目的基因的PCR擴(kuò)增
    3.2 重組質(zhì)粒pICP6-MD18的鑒定
    3.3 重組pICP6-EGFP質(zhì)粒的鑒定
    3.4 重組pICP6-EGFP質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及檢測(cè)
    3.5 Vero-ICP6-EGFP特異性的檢測(cè)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
文獻(xiàn)綜述



本文編號(hào)：3205088