目的 構建人單純皰疹病毒1型（herpes simplex virus，HSV-1）綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）真核表達系統(tǒng)，用于HSV感染的快速診斷。 方法 提取HSV-1 DNA，利用DNA Star軟件設計對應于HSV-1 SM44株ICP6啟動子的PCR引物，引入BamHI和HindⅢ酶切位點。PCR擴增目的基因片段，將回收純化的PCR產物連接至pMD18-T載體構建亞克隆，切下目的基因，連接至真核表達載體pEGFP-1構建重組質粒pICP6-EGFP，經雙酶切和DNA測序鑒定后，以陽離子脂質體法（Lipofectamine2000）轉染Vero細胞。轉染48h后，加入G418（400μg／ml）篩選陽性細胞克隆，進行放大培養(yǎng)建立穩(wěn)定轉染細胞株Vero-ICP6-EGFP細胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP細胞，分別于感染后6h、8h、10h，以倒置熒光顯微鏡檢測GFP熒光；于感染后15h以流式細胞術測定GFP熒光的量和強度；同時以人巨細胞病毒和柯薩奇病毒檢測Vero-ICP6-EGFP細胞誘導表達的特異... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 目的基因的選擇及引物設計
    2.3 目的基因的獲得及純化
    2.4 載體pEGFP-1的制備
    2.5 pICP6-EGFP重組克隆的構建
    2.6 重組質粒pICP6-EGFP的轉染及檢測
3 結果
    3.1 目的基因的PCR擴增
    3.2 重組質粒pICP6-MD18的鑒定
    3.3 重組pICP6-EGFP質粒的鑒定
    3.4 重組pICP6-EGFP質粒的轉染及檢測
    3.5 Vero-ICP6-EGFP特異性的檢測
4 討論
5 結論
參考文獻
附錄
致謝
文獻綜述



本文編號：3205088