目的探討微小RNA-383（miR-383）在小鼠卵泡不同發(fā)育階段的表達(dá)規(guī)律以及對(duì)顆粒細(xì)胞增殖的影響。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、 21、 21 d[腹腔注射10 IU孕馬血清促性腺激素（PMSG）48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人絨毛膜促性腺激素（hCG）6 h后]的卵巢組織、卵泡和顆粒細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)miR-383的表達(dá)情況。取小鼠出生21 d的顆粒細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染miR-383模擬物（miR-383 mimics）或miR-383抑制物（miR-383 inhibitor）,另外設(shè)置陰性對(duì)照組。通過(guò)噻唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)顆粒細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顆粒細(xì)胞的細(xì)胞周期變化。采用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）、 cyclin B、細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)激酶1（CDK1）、 CDK2、 CDK4的蛋白水平。結(jié)果與小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔較小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又進(jìn)一步降低。與小腔前卵泡顆粒細(xì)胞相比,大腔前卵泡... 

【文章來(lái)源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 分離卵泡
        1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)卵泡組織miR-383水平
        1.2.3 顆粒細(xì)胞的分離與收集
        1.2.4 顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.5 MTT法檢測(cè)顆粒細(xì)胞增殖
        1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
        1.2.7 Western blot法檢測(cè)顆粒細(xì)胞cyclin D1、 cyclin B、 CDK1、 CDK2、 CDK4蛋白水平
        1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 卵巢組織miR-383水平隨小鼠卵泡發(fā)育而降低, 超排激素處理的卵巢組織miR-383水平增加
    2.2 小鼠不同發(fā)育階段的卵泡中miR-383水平不同
    2.3 隨著小鼠卵泡發(fā)育, 顆粒細(xì)胞中miR-383水平逐漸降低, 但成熟卵泡顆粒細(xì)胞中miR-383的相對(duì)含量增加
    2.4 miR-383 mimics或inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證
    2.5 miR-383 mimics轉(zhuǎn)染抑制顆粒細(xì)胞增殖, 但miR-383 inhibitor轉(zhuǎn)染作用相反
    2.6 miR-383 mimics或inhibitor轉(zhuǎn)染對(duì)顆粒細(xì)胞增殖周期的影響
    2.7 miR-383 mimics或inhibitor轉(zhuǎn)染對(duì)顆粒細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3200391