發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 15:02

　　為了初步明確lytR基因的保守性以及探討LytR蛋白在肺炎鏈球菌中的生物學(xué)功能。本研究利用PCR和測(cè)序方法分析lytR基因20種不同序列型肺炎鏈球菌臨床分離株的保守性;利用Western blotting技術(shù)分析lytR在細(xì)菌不同生長(zhǎng)階段的表達(dá)情況;隨后,利用紅霉素片段替代lytR基因構(gòu)建D39ΔlytR缺陷菌株,通過(guò)生長(zhǎng)曲線分析、電鏡下形態(tài)觀察、以及磷壁酸含量測(cè)定揭示LytR蛋白在細(xì)菌生長(zhǎng)、細(xì)菌形態(tài)以及磷壁酸合成中的作用。研究發(fā)現(xiàn)20種不同序列型肺炎鏈球菌臨床菌株的lytR基因序列一致性>99.3%;Western blotting結(jié)果顯示lytR在細(xì)菌不同生長(zhǎng)階段穩(wěn)定表達(dá);D39ΔlytR缺陷株生長(zhǎng)明顯變緩,細(xì)菌表現(xiàn)為不成熟自溶;D39ΔlytR全菌磷壁酸含量顯著減少,而培養(yǎng)基上清中的磷壁酸含量顯著增多。本研究表明lytR基因非常保守,在肺炎鏈球菌不同生長(zhǎng)階段均有表達(dá),并可能通過(guò)連接酶的作用影響細(xì)菌生長(zhǎng)和參與肺炎鏈球菌磷壁酸的合成,有望成為一種新的抗生素和藥物靶點(diǎn)。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019,38(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 lytR基因保守性分析
    1.2 不同生長(zhǎng)階段LytR蛋白表達(dá)情況分析
    1.3 lytR缺陷菌的構(gòu)建及鑒定
    1.4 lytR基因缺失導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)受損
    1.5 lytR與細(xì)菌磷壁酸的合成有關(guān)
    1.6 lytR影響肺炎鏈球菌磷壁酸的胞外連接
2 討論
3 材料與方法
    3.1 菌株
    3.2 試劑和相關(guān)材料
    3.3 lytR基因保守性分析
    3.4 PCR擴(kuò)增lytR基因上、下游側(cè)臂片段
    3.5 肺炎鏈球菌的實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)化
    3.6 肺炎鏈球菌D39ΔlytA、D39ΔlytRΔlytA的構(gòu)建以及D39ΔlytR compl (回補(bǔ)株) 的構(gòu)建
    3.7 Western blotting分析
    3.8 生長(zhǎng)曲線
    3.9 磷壁酸的ELSIA測(cè)定
    3.1 0 磷壁酸的Dot blot測(cè)定
    3.1 1 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
作者貢獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化[J]. 代軍.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(04)
[2]肺炎鏈球菌假想轉(zhuǎn)錄因子LytR的表達(dá)、純化、晶體生長(zhǎng)及優(yōu)化[J]. 閔迅,鐘文,趙沙沙,董杰,董珊珊,周愛(ài)娥,閆文娟,汪德強(qiáng).  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2013(04)
[3]一種減毒肺炎鏈球菌溶血素突變體的構(gòu)建與表達(dá)[J]. 吳凱峰,張薇薇,崔亞利,張雪梅,胥文春,龐丹,劉鑫,王虹.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2010 (05)



本文編號(hào)：3197960