目的制備納爾遜海灣病毒（NBV）S3多克隆抗體。方法首先將構建好的Pris20His20MB-S3重組基因質粒,轉化到大腸桿菌（E.coil）BL21（DE3）感受態(tài)細胞中,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導蛋白表達。鎳柱親和層析法純化目的蛋白以獲得大量融合重組蛋白,以此為抗原免疫大鼠制備抗S3多克隆抗體并進行鑒定。結果20Pris20His20MB-S3蛋白的相對分子質量（M_r）約3920000,以包涵體形式存在,通過免疫大鼠成功制備出NBV20S3多克隆抗體。間接ELISA測定抗體效價達1∶6420000。間接免疫熒光實驗證明S3蛋白成功在細胞內表達并以顆粒狀分布在細胞質內。結論成功獲得高反應性和高特異性的S3蛋白多克隆抗體。 

【文章來源】：細胞與分子免疫學雜志. 2019,35(05)北大核心CSCD

【文章頁數】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白在大腸桿菌中的表達
        1.2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的純化
        1.2.3 Western blot法鑒定純化的目的蛋白
        1.2.4 Pris His MB-S3融合蛋白多克隆抗體制備
        1.2.5 多克隆抗體的Western blot法鑒定
        1.2.6 間接ELISA測定抗體效價
        1.2.7 間接免疫熒光技術 (indirect immunoinfluscent assay, IFA) 檢測抗體對HEK293細胞病毒抗原的識別特異性
        1.2.8 IFA檢測S3基因轉染HEK293細胞S3蛋白的表達
2結果
    2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白的誘導表達
    2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的純化
    2.3 Western blot法檢測純化的目的蛋白
    2.4 多克隆抗體抗性的檢測
    2.5 ELISA測定抗體效價為1∶64 000
    2.6 制備的抗體特異性識別感染病毒的HEK293細胞S3蛋白
    2.7 制備的抗體能檢測出HEK293細胞表達的S3融合蛋白
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3177635