目的制備納爾遜海灣病毒（NBV）S3多克隆抗體。方法首先將構(gòu)建好的Pris20His20MB-S3重組基因質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（E.coil）BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。鎳柱親和層析法純化目的蛋白以獲得大量融合重組蛋白,以此為抗原免疫大鼠制備抗S3多克隆抗體并進(jìn)行鑒定。結(jié)果20Pris20His20MB-S3蛋白的相對分子質(zhì)量（M_r）約3920000,以包涵體形式存在,通過免疫大鼠成功制備出NBV20S3多克隆抗體。間接ELISA測定抗體效價達(dá)1∶6420000。間接免疫熒光實驗證明S3蛋白成功在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并以顆粒狀分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。結(jié)論成功獲得高反應(yīng)性和高特異性的S3蛋白多克隆抗體。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
        1.2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的純化
        1.2.3 Western blot法鑒定純化的目的蛋白
        1.2.4 Pris His MB-S3融合蛋白多克隆抗體制備
        1.2.5 多克隆抗體的Western blot法鑒定
        1.2.6 間接ELISA測定抗體效價
        1.2.7 間接免疫熒光技術(shù) (indirect immunoinfluscent assay, IFA) 檢測抗體對HEK293細(xì)胞病毒抗原的識別特異性
        1.2.8 IFA檢測S3基因轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞S3蛋白的表達(dá)
2結(jié)果
    2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的純化
    2.3 Western blot法檢測純化的目的蛋白
    2.4 多克隆抗體抗性的檢測
    2.5 ELISA測定抗體效價為1∶64 000
    2.6 制備的抗體特異性識別感染病毒的HEK293細(xì)胞S3蛋白
    2.7 制備的抗體能檢測出HEK293細(xì)胞表達(dá)的S3融合蛋白
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗非洲馬瘟VP7蛋白的小鼠單克隆抗體制備及其鑒定[J]. 杜方原,馮春燕,王彩霞,仇松寅,張永寧,林祥梅,吳紹強.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2018(12)
[2]大腸桿菌絲狀熱敏蛋白Z相互作用蛋白A（Ec-ZipA）原核表達(dá)、純化與大鼠多克隆抗體的制備[J]. 陳云雨,牛夏憶,林媛,劉曉平.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2018(10)
[3]抗棉鈴蟲Ⅳ型幾丁質(zhì)酶（HaCHT4）小鼠多克隆抗體的制備與鑒定[J]. 麥麥提艾力·阿卜杜納斯?fàn)?古新蓉,馬紀(jì),馬小麗,劉小寧.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2018(09)
[4]人致病性呼腸孤病毒M3編碼蛋白純化及多克隆抗體制備[J]. 陳江曼,李永剛,王佳美,佟偉,任雨舒,李新.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2016(18)



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