發(fā)布時間：2017-04-19 15:15

  本文關(guān)鍵詞：多重耐藥性鮑曼不動桿菌噬菌體的篩選及其理化性質(zhì)與生物信息學(xué)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究探索應(yīng)用裂解性噬菌體防控醫(yī)院中普遍存在的多重耐藥鮑曼不動桿菌,為多重耐藥菌的防控提供一條新途徑。同時,對該菌的特異裂解性噬菌體的理化性質(zhì)進(jìn)行分析,并對其進(jìn)行全基因組測序分析,從分子水平及基因水平上評價該噬菌體的施用安全性。方法:從醫(yī)院病人的血液組織中分離純化病原菌,經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實驗、16S r RNA序列分析、藥敏實驗分析對病原菌進(jìn)行分類鑒定并確定其耐藥性。將分離的病原菌作為宿主菌,采用雙層平板法從醫(yī)院廢水中分離得到該菌的特異裂解性噬菌體。該噬菌體純化后,通過透射電鏡觀察,考察其氯仿敏感性、p H穩(wěn)定性、宿主譜、潛伏期、裂解量等噬菌體生物學(xué)特性,將篩選獲得的裂解性噬菌體命名為PAb-3。隨后,將該噬菌體的懸浮液進(jìn)行氯化銫密度梯度離心,采用常規(guī)的酚-氯仿-異戊醇提取方法對該噬菌體的全基因組進(jìn)行提取,并對其進(jìn)行全基因組測序,采用相應(yīng)的測序分析軟件分析該噬菌體的基因組成成分及相應(yīng)的基因功能。結(jié)果:經(jīng)檢驗科的生理生化分析及16S r RNA序列分析,確定該病原菌為鮑曼不動桿菌(A.baumannii),命名為AB0815。藥敏實驗結(jié)果表明,該病原菌為耐第四代頭孢菌素類的多重耐藥性菌株。本實驗分離篩選的噬菌體可在雙層瓊脂平板上形成圓形透亮大小均一、直徑約0.8mm的噬菌斑。透射電鏡觀察結(jié)果顯示,噬菌體PAb-3頭部衣殼直徑為90±3nm,體長為205±4nm,形態(tài)學(xué)鑒定該噬菌體屬肌尾噬菌體科(Myoviridae)。噬菌體PAb-1感染宿主菌的潛伏期為25min,裂解期為65min,爆發(fā)量達(dá)243PFU/infected cell。該噬菌體對宿主菌AB0815專一性強(qiáng),對氯仿不敏感。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,噬菌體PAb-3含有8個條帶,表明其至少含有8個結(jié)構(gòu)蛋白,其中濃度最高的條帶代表了噬菌體的衣殼蛋白。全基因組測序分析結(jié)果顯示,該噬菌體的基因組大小為44,781bp,G+C%為42.14%(A=29.56%、T=28.30%、G=20.18%、C=21.96%)�；蚪M生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,該噬菌體基因組含有44個CDS,經(jīng)過NCBI比對分析,有23個基因確定功能,且該噬菌體不包含毒力因子及內(nèi)毒素合成基因。結(jié)論:該病原菌為耐第四代頭孢菌素類的多重耐藥性菌株,并篩選到該菌的裂解性噬菌體一株。噬菌體的一步生長曲線結(jié)果表明,該噬菌體潛伏期短,裂解周期短,裂解性強(qiáng)。該噬菌體對宿主菌AB0815專一性強(qiáng),對氯仿不敏感。該噬菌體不包含毒力因子及內(nèi)毒素合成基因,說明了該噬菌體的安全性較高,具有潛在的應(yīng)用價值。親緣關(guān)系分析結(jié)果顯示,該噬菌體的分類地位為有尾噬菌體目,肌尾噬菌體科,T4噬菌體屬。
【關(guān)鍵詞】：鮑曼不動桿菌 細(xì)菌耐藥性 噬菌體 基因組測序分析 進(jìn)化分析
【學(xué)位授予單位】：大連大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 1 致病菌的分離鑒定14-22
• 1.1 實驗用品14-16
• 1.1.1 實驗材料14
• 1.1.2 實驗試劑14
• 1.1.3 實驗儀器設(shè)備14-15
• 1.1.4 試劑配制15-16
• 1.1.516SrRNA引物設(shè)計16
• 1.2 實驗方法16-17
• 1.2.1 病原菌的分離培養(yǎng)及保藏16
• 1.2.2 病原菌的分類鑒定16-17
• 1.2.3 病原菌的生理生化鑒定17
• 1.2.4 病原菌的耐藥性分析17
• 1.3 實驗結(jié)果17-21
• 1.3.1 病原菌的分離純化結(jié)果17-18
• 1.3.2 病原菌的電鏡觀察結(jié)果18-19
• 1.3.3 病原菌生理生化指標(biāo)測定結(jié)果19-20
• 1.3.4 病原菌藥敏實驗結(jié)果20
• 1.3.5 病原菌 16SrRNA序列分析結(jié)果20-21
• 1.4 小結(jié)21-22
• 2 致病菌特異性噬菌體的篩選及理化性質(zhì)分析22-33
• 2.1 實驗用品22-24
• 2.1.1 實驗材料22
• 2.1.2 實驗試劑22
• 2.1.3 實驗儀器與設(shè)備22-23
• 2.1.4 試劑的配制23-24
• 2.2 實驗方法24-28
• 2.2.1 噬菌體的分離純化24-26
• 2.2.2 噬菌體透射電鏡觀察26
• 2.2.3 氯仿敏感性測試26
• 2.2.4 噬菌體宿主譜26
• 2.2.5 噬菌體吸附速率測定26-27
• 2.2.6 噬菌體一步生長曲線27
• 2.2.7 噬菌體對溫度、pH耐受性27
• 2.2.8 噬菌體體外抑菌實驗27-28
• 2.2.9 統(tǒng)計分析28
• 2.3 實驗結(jié)果及分析28-32
• 2.3.1 噬菌體的分離純化結(jié)果28
• 2.3.2 噬菌體的電鏡觀察結(jié)果28-29
• 2.3.3 噬菌體氯仿敏感性測試結(jié)果29
• 2.3.4 噬菌體宿主譜檢測結(jié)果29-30
• 2.3.5 噬菌體吸附速率測定結(jié)果30
• 2.3.6 噬菌體一步生長曲線結(jié)果30-31
• 2.3.7 噬菌體對溫度、pH的耐受性測試結(jié)果31-32
• 2.3.8 噬菌體PhageAb-3 的體外裂解實驗結(jié)果32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 3 噬菌體基因組的提取及其全基因組測序分析33-52
• 3.1 實驗用品33-35
• 3.1.1 實驗材料33
• 3.1.2 實驗試劑33-34
• 3.1.3 實驗儀器與設(shè)備34
• 3.1.4 試劑配制34-35
• 3.2 實驗方法35-39
• 3.2.1 噬菌體顆粒的濃縮35-36
• 3.2.2 噬菌體顆粒的純化36
• 3.2.3 噬菌體全基因組提取36-37
• 3.2.4 噬菌體全基因組瓊脂糖凝膠電泳分析及其全蛋白電泳分析293.2.5 噬菌體PAb-3 全基因組測序37
• 3.2.5 噬菌體 PAb-3 全基因組測序37-38
• 3.2.6 噬菌體PAb-3 核酸結(jié)構(gòu)鑒定38
• 3.2.7 噬菌體PAb-3 功能基因組學(xué)分析38
• 3.2.8 噬菌體PAb-3 同源性分析38-39
• 3.3 實驗結(jié)果與分析39-51
• 3.3.1 噬菌體PAb-3 的全基因組提取結(jié)果39
• 3.3.2 噬菌體PAb-3 的全蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果39-40
• 3.3.3 噬菌體PAb-3 的基因結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果40
• 3.3.4 噬菌體PAb-3 基因組一般性質(zhì)分析結(jié)果40-43
• 3.3.5 噬菌體PAb-3 基因組CDS預(yù)測結(jié)果43-45
• 3.3.6 噬菌體PAb-3 基因分布統(tǒng)計結(jié)果45
• 3.3.7 噬菌體PAb-3 基因組功能基因注釋與分析45-49
• 3.3.8 噬菌體PAb-3 親緣關(guān)系分析結(jié)果49-51
• 3.4 小結(jié)51-52
• 討論52-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 綜述57-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 附錄A AB0815 的 16S rRNA測序結(jié)果71-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 汪復(fù);朱德妹;胡付品;阮斐怡;倪語星;孫景勇;徐英春;張小江;胡云健;艾效曼;俞云松;楊青;孫自鏞;李麗;賈蓓;黃文祥;卓超;蘇丹虹;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;王傳清;薛建昌;張泓;李萬華;徐元宏;沈繼錄;單斌;杜艷;;2009年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測[J];中國感染與化療雜志;2010年05期

2 曹振輝;金禮吉;徐永平;李淑英;張建城;馬永生;李化強(qiáng);曹放;楊揚(yáng);;噬菌體控制主要食源性致病菌的研究進(jìn)展[J];食品科學(xué);2013年05期

3 張亞英;姜亦虹;沈黎;李春紅;;重癥監(jiān)護(hù)病房4例泛耐藥鮑氏不動桿菌肺部感染暴發(fā)[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2010年12期

  本文關(guān)鍵詞：多重耐藥性鮑曼不動桿菌噬菌體的篩選及其理化性質(zhì)與生物信息學(xué)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：316555