目的制備抗剛地弓形蟲前纖維蛋白（Tg PRF）的多克隆抗體,初步研究其對剛地弓形蟲在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞中增殖的影響。方法提取剛地弓形蟲RH株RNA、擴(kuò)增Tg PRF基因,并構(gòu)建pET-30a （+）-Tg PRF重組質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21 （DE3）感受態(tài)細(xì)胞,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）鑒定蛋白表達(dá)情況。目的蛋白經(jīng)AKTA系統(tǒng)進(jìn)行親和層析純化和超濾濃縮后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析（Western blotting）。將2 mg純化的重組蛋白Tg PRF與等體積弗氏完全佐劑混合乳化后,背部皮下多點注射免疫新西蘭兔2只,首次免疫后每隔2周,用1 mg純化的重組蛋白Tg PRF與等體積弗氏不完全佐劑加強免疫3次,末次免疫后10 d心臟采血。免疫后血清進(jìn)行Western blotting鑒定及ELISA抗體效價檢測。將胚胎成纖維細(xì)胞接種于96孔板中（4×10³個細(xì)胞/孔）,并加入10⁴個剛地弓形蟲速殖子（RH-GFP）。設(shè)空白對照組（A組）,抗體干預(yù)組（B1、 B2和... 

【文章來源】：中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2019,37(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、菌株、動物和蟲種來源
    1.2 主要試劑
    1.3 重組質(zhì)粒pET-30a（+）-Tg PRF的構(gòu)建
    1.4 Tg PRF蛋白在E.coli BL21（DE3）中的表達(dá)及鑒定
    1.5 Tg PRF蛋白的多克隆抗體制備和效價、毒性檢測
    1.6 Tg PRF多克隆抗體對弓形蟲速殖子體外增殖的影響
    1.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.8 倫理批準(zhǔn)和患者知情同意
2 結(jié)果
    2.1 Tg PRF基因的擴(kuò)增和重組質(zhì)粒pET-30a（+）-Tg PRF的構(gòu)建
    2.2 重組質(zhì)粒在BL21（DE3）中的表達(dá)及鑒定
    2.3 Tg PRF多克隆抗體鑒定及毒性、效價檢測
    2.4 Tg PRF多克隆抗體對弓形蟲速殖子體外增殖的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]剛地弓形蟲在我國男性人群的流行及其與男性生殖障礙關(guān)系的Meta分析[J]. 楊瑞,李佩珍,岳續(xù)朋,夏嬙,杜聯(lián)峰,盧彥欣,廖業(yè),郭錦錦.  中國人獸共患病學(xué)報. 2016(09)
[2]剛地弓形蟲自噬相關(guān)蛋白3基因的克隆表達(dá)與多抗制備[J]. 華倩倩,李相志,萬玉靜,陳弟,趙徐寒暉,蔣凱,胡昕,潘長旺,譚峰.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2014(06)



本文編號：3150519