融合蛋白（fusion protein）是將兩個或兩個以上的基因通過一定方式連接在一起共同表達出的重組蛋白。標簽融合蛋白（tag fusion protein）是融合蛋白的一種，它是由目的蛋白（target protein）和融合標簽（fusion tag）共同構(gòu)成的蛋白嵌合體。常見的融合標簽包括：多聚組氨酸（poly-His）、FLAG多肽、葡萄球菌蛋白A（SPA）、免疫球蛋白的Fc段以及谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）等。融合標簽的使用不僅方便了目的蛋白的表達和純化，同時為目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的研究提供了便利手段。隨著人類基因組計劃（Human Genome Project，HGP）的完成，后基因組學（post-genomics）和蛋白質(zhì)組學（proteomics）已經(jīng)成為生命科學發(fā)展的重點，這一時期，科學家面臨的最大挑戰(zhàn)是在整體水平上系統(tǒng)地、綜合地研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能以及蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子之間的相互作用。蛋白質(zhì)的表達和純化是蛋白質(zhì)研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與標簽蛋白融合表達提供了一個高通量（high-through）表達和篩選功能蛋白的平臺，因而為學者廣泛重視，已成為一條聯(lián)系基因組和... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

融蛋白克隆載體及其克隆外源基因的

入△22有2個，入△23有3個。這就使外源基因插入到EcoRI位點后，會形成三種全部可能的相對lacZ基因轉(zhuǎn)譯起點的讀碼結(jié)構(gòu)，而其中必定有一種是正確的(圖4)。診月月翻尸門門o}}二。，】4八酬，二牛書1以廳朽c邢l巴—-一腸“峨r如‘2、.畝一I丫0-門廠節(jié)門廣”紐”拍“倪l基.衛(wèi)如‘I.}{。〔_!=書】.講升~訂^^l}。圖3融蛋白克隆載體及其克隆外源基因的圖4以Lacz為靶基因的融合載體組示意圖合Omp:大腸桿菌胞膜蛋白Omp基因片段LacZ:日一半乳糖普酶基因(3)通過相互匹配的寡核昔酸(dA一dT或dC一dG)的延伸進行連接，由于寡核昔酸延伸的數(shù)目長短不一，這樣自然可以形成三種讀框的重組體(圖5)。例如，1978年LVina-Komaro任等利用這種策略克隆并表達了大鼠的前胰島素原。他們將大鼠前胰島素原mRNA反轉(zhuǎn)錄成eDNA，然后用末端轉(zhuǎn)

大利亞科學家Wilkins等首先提出的〔35〕，是指一個細胞部蛋白質(zhì)成分。對蛋白質(zhì)組進行系統(tǒng)研究的科學稱為omi。s)。隨著后基因組時代的到來，蛋白質(zhì)組學越來越受切關(guān)注。我國國家自然基金委員會己經(jīng)把蛋白組學的研目。組學的研究的主要范疇包括:蛋白質(zhì)的分離與鑒定、蛋究以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)生物學的研究。融合標簽在這些領(lǐng)域。)應用于蛋白質(zhì)的分離和鑒定研究表明，在細胞中大多合物來發(fā)揮作用的，分離并鑒定這些蛋白復合物中的組究具有重大意義。通過建立多親和純化標簽(multipleafationtag，MAFTtag)或串聯(lián)親和純化標簽(TAP)人們體系中純化出所需的蛋白質(zhì)復合物，然后再通過電泳、質(zhì)復合物的詳細組成〔27.35，(圖6)。除TAP以外，單一標和純化蛋白質(zhì)復合物。例如LonPhan等，利用His6融合rtlP成功地分離并鑒定了在酵母和哺乳動物中高度保守的eIF3核心復合物(e正3一eoreeo卿lex)。.p.p針0.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CD/Ig融合蛋白研究及應用概況[J]. 孫凱,馮琦,金伯泉.  中華內(nèi)科雜志. 2000(06)



本文編號：3147269