目的：研究SNP敏感性納米級(jí)復(fù)合分子開(kāi)關(guān)在Y染色體識(shí)別中的應(yīng)用。 方法：選擇性別表型正常者為研究對(duì)象，肘正中靜脈采血5ml，加0.5ml肝素抗凝，-20℃保存?zhèn)溆�。采用酚／氯仿法提取基因組DNA，0.8％瓊脂糖凝膠電泳鑒定，紫外分光光度儀測(cè)定OD260／280值，分管保存?zhèn)溆�。根�?jù)Y染色體基因序列及SNP信息，設(shè)計(jì)引物。實(shí)驗(yàn)分四步驟進(jìn)行。首先采用X染色體特異性引物X1、Y染色體特異性引物Y02和Y染色體常染色體同源區(qū)引物Y2進(jìn)行普通PCR對(duì)已知性別的樣本進(jìn)行檢測(cè)，比較Taq酶與Pfu酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異；其次用實(shí)時(shí)定量PCR和分子開(kāi)關(guān)，Y染色體特異性引物Y02和Y染色體常染色體同源區(qū)引物Y2，對(duì)已知性別的樣本進(jìn)行檢測(cè)；第三用普通PCR，Y染色體M45（rs2032631）、M89（rs2032652）、M172（rs2032604）SNP位點(diǎn)引物，對(duì)已知性別的樣本進(jìn)行檢測(cè)，比較Taq酶與Pfu酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異；最后用反向巢式PCR對(duì)Y染色體M45（rs2032631）、M89（rs2032652）、M172（rs2032604）SNP位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，比較Taq酶與Pfu酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Taq酶介導(dǎo)的引物延伸反應(yīng)電泳圖

小于女性DNA樣本，陰性對(duì)照未見(jiàn)指數(shù)擴(kuò)增曲線;使用引物Y02的引物延伸反應(yīng)中，只有男性DNA樣本指數(shù)擴(kuò)增曲線，女性DNA樣本和陰性對(duì)照未見(jiàn)指數(shù)擴(kuò)增曲線(圖3，4，5，6)。圖3引物Y2實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增曲線圖

引物Y2實(shí)時(shí)PcR產(chǎn)物熔點(diǎn)曲線圖


本文編號(hào)：3136796