�、倌康摹�(gòu)建人巨細(xì)胞病毒 （HCMV） pp15 0的原核高效表達(dá)系統(tǒng) ,制備用于急性、活動(dòng)性HCMV感染血清學(xué)診斷的基因工程抗原。②方法　PCR擴(kuò)增HCMVpp15 0抗原決定簇 （84 0～ 10 4 8aa）編碼基因片段 ,分別插入原核表達(dá)載體 pMAL p2、pET 2 8a ,轉(zhuǎn)化宿主菌E .coli.誘導(dǎo)表達(dá) ,經(jīng)麥芽糖親和層析樹脂純化 ,以Western Blot及間接ELISA法鑒定其抗原性。③結(jié)果　重組表達(dá)質(zhì)粒 pMAL p2 pp15 0可在E .coli.DH5α中有效表達(dá) ,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS PAGE電泳后 ,凝膠成像系統(tǒng)分析顯示相對(duì)分子質(zhì)量約為 6 .4萬 ,約占菌體蛋白的 10 %。而重組質(zhì)粒pET 2 8a pp15 0未見明顯表達(dá)帶。Western Blot檢測(cè) ,陽性識(shí)別率為 80 % （12 / 15 ）。用此蛋白包被ELISA板 ,檢測(cè)正常孕婦血清 ,陽性率為 6 .5 % （17/ 2 6 3）。與本室制備的全病毒抗原ELISA的診斷符合率為 96 %。④結(jié)論此重組蛋白具有良好的抗原性 ,進(jìn)一步完善后可用于HCMV急性和活動(dòng)性感染的診斷。 

【文章來源】：青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2003,(01)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET-28a-pp150和pMAL-p2-pp150酶切鑒定

IgM陰性血清均為陰性,表明此融合蛋白識(shí)別IgM特異性抗體的識(shí)別率為80%。陽性血清與MBP無反應(yīng)。見圖3。用純化重組蛋白包被ELISA板,檢測(cè)正常孕婦血清標(biāo)本263份,其中17份陽性,與本室制備的全病毒抗原ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較,診斷符合率為96%。見表1。圖3　表達(dá)蛋白的Western印跡分析①蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),②重組體表達(dá)產(chǎn)物,③MBP對(duì)照表1　重組抗原與全病毒抗原ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較(份)方法重組抗原ELISA法陽性陰性合計(jì)全病毒抗原陽性10 3 13ELISA法陰性7 243 250　合計(jì)17 246 2633　討　　論人巨細(xì)胞病毒感染極為常見,一般不表現(xiàn)臨床癥狀

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人巨細(xì)胞病毒重組抗原在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的應(yīng)用研究[J]. 阮強(qiáng),郭津津,趙玉坤,劉蘭青,呂繩敏,史金陽,劉慶.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1999(03)



本文編號(hào)：3118605