【目的】研究觀察間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）在體外培養(yǎng)體系對(duì)B細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)作用的影響�！痉椒ā坎捎妹芏忍荻入x心法分離健康捐獻(xiàn)者來源的骨髓30 mL。用含100 mmol/L胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)基對(duì)分離出的MSC進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)至第6代時(shí),進(jìn)行多向分化和細(xì)胞表型鑒定。獲取健康供者外周血單個(gè)核細(xì)胞,并通過流式細(xì)胞儀分選出CD19⁺B細(xì)胞,進(jìn)行熒光染料CFSE標(biāo)記,然后分成單獨(dú)培養(yǎng)組（CD19⁺B細(xì)胞）和共培養(yǎng)組（按CD19⁺B∶MSC:=5∶1的比例共培養(yǎng)）,兩組均采用CpG+CD40L刺激,96 h后檢測(cè)B細(xì)胞的增殖情況,并通過流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)（FACS）檢測(cè)CD19⁺CD5⁺B細(xì)胞的百分比及其分泌的IL-10水平;進(jìn)一步觀察單獨(dú)培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組的CD19⁺B細(xì)胞對(duì)CD4⁺T細(xì)胞增殖以及分泌IFN-γ的影響,最后加入IL-10中和抗體,再次驗(yàn)證B細(xì)胞對(duì)CD4⁺T細(xì)胞增殖以及分泌IFN-γ的影響�！窘Y(jié)果】... 

【文章來源】：中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019,40(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

MSC體外誘導(dǎo)分化及表面標(biāo)記分子Fig.1MSCinduceddifferentiationandphenotypeinvitroDCDCounA：Adherentandspindle-shapedMSC（100×）；B：Alizarinredstaining（100×）；C：Oilredstaining；D：MSCphenotype

：Thebargraphsindicatethemeans±SD.1）P=0.003,n=3.圖3MSC促進(jìn)CD19+B細(xì)胞分泌IL-10Fig.3MSCenhancestheIL-10secretionofCD19+BcellsCD19+BCD19+B+MSCF：31.97%F：42.73%CFSE1）CD19+BCD19+B+MSC50403020100CFSEpostivecelnumber/%CelnumberABA：TheB-cellproliferativeresponsewasevaluatedbytheCFSE；B：Thebargraphsindicatethemeans±SD.1）P=0.016，n=3.圖2MSC促進(jìn)CD19+B細(xì)胞增殖Fig.2MSCpromotesproliferationofCD19+Bcells2.2MSC在體外促進(jìn)B細(xì)胞的增殖及其分泌IL-10為了探討MSC在體外對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的影響，我們首先對(duì)MSC在體外對(duì)B細(xì)胞增殖及分泌相關(guān)因子功能的影響進(jìn)行了研究觀察。我們利用CFSE熒光標(biāo)記系統(tǒng)來評(píng)估B細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)組中B細(xì)胞增殖的比例為（33.13±1.11）%；共培養(yǎng)組中B細(xì)胞增殖的比例為（42.30±0.58）%，以上實(shí)驗(yàn)細(xì)胞均重復(fù)3次，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組之間的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=2.6，P=0.016，圖2A、B）。IL-10是炎癥反應(yīng)中重要的抑炎因子。為了進(jìn)一步分析MSC對(duì)B細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的影響，我們又對(duì)MSC在體外是否具有促進(jìn)B細(xì)胞分泌抑炎癥因子進(jìn)行了研究。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，在采用CpG+重組人可溶性CD40L預(yù)先刺激B細(xì)胞的條件下，共培養(yǎng)組分泌IL-10的B細(xì)胞的比例由（0.48±0.04）%增加至1.25%±0.07%，與單獨(dú)培養(yǎng)組的B細(xì)胞比較，兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.7，P=0.003

means±SD.1）P<0.01，2）P<0.05，n=3.圖5MSC增強(qiáng)CD19+B細(xì)胞抑制CD4+T細(xì)胞分泌IFN-γFig.5MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitthesecretionofIFN-γbyCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCD4IFN-γ12.964.266.321）2）CD4+TBCell+MSCBCell201612840IFN-γ/%ABA：TheTcellandBcellproliferationwasevaluatedbytheCFSEdilution；B：Thebargraphsindicatethemeans±SD.1）P<0.01,2）P<0.05,n=3圖4MSC增強(qiáng)CD19+B細(xì)胞對(duì)CD4+T細(xì)胞增殖的抑制能力Fig.4MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCelnumberCFSE1）2）CD4+TBCell+MSCBCell806040200CFSEpostivecelnumber/%AB59.29%24.78%33.51%胞儀對(duì)CD19+B細(xì)胞相關(guān)亞群細(xì)胞進(jìn)行了分析，結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)組中CD19+CD5+B細(xì)胞亞群的比例明顯增加，而其它調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群中CD27+CD24hiB細(xì)胞與CD38hiCD24hiB細(xì)胞反而呈減少趨勢(shì)（圖6A、B，7A）。我們已在前面的研究中發(fā)現(xiàn)MSC能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖并且能增加其IL-10的分泌，而CD19+B細(xì)胞與MSC共培養(yǎng)后，能明顯抑制CD4+T細(xì)胞的增殖并減少其IFN-γ的分泌水平，這是否與其分泌IL-10相關(guān)？因此，我們又繼續(xù)分析B細(xì)胞中具有分泌IL-10的CD5+B細(xì)胞亞群，結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)組中CD5+B細(xì)胞數(shù)量的百分比由單獨(dú)培養(yǎng)條件下的（21.31±1.22?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3057299