慢性髓性白血�。–hronic myeloid leukemia, CML）是一種起源于多能干細胞的惡性增生性疾病，其最重要的細胞遺傳學特征是存在特異性的Ph染色體，第9號染色體上的原癌基因c-ab1易位到第22號染色體的斷點集中區(qū)（bcr）形成bcr-ab1融合基因，編碼bcr-ab1融合蛋白(p210^bcr-ab1)。p210^bcr-ab1具有高酪氨酸激酶活性，與細胞惡性轉化密切相關，而p210^bcr-ab1的抗原性限定在其融合位點內，這段氨基酸序列在正常細胞中不存在，因此該序列可作為腫瘤特異性抗原。本研究從以下三個方面探索利用bcr-ab1融合基因片段制備CML基因疫苗的研究。 一、慢性髓性白血病bcr-ab1融合基因片段的克隆與原核表達的研究 以慢性髓性白血病細胞株K562細胞總RNA為模板，采用RT-PCR技術擴增包含bcr-ab1融合位點周圍的基因片段，定向克隆到pGEX-6P-1載體谷光甘肽-S-轉移酶（GST）的下游。將重組質粒轉化大腸桿菌BL₂₁菌株，以1.0mmol／... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

RT-PCR擴增飲矛曲l融合基因片段

圖I.ZPGEx一bcr-abl酶切鑒定g.1.2RusultsofPGEX一阮卜abldigestedwithrestrictivee‘守me1.功NA一HindlllMarker;2.EcoRI單酶切;3.EcoRI單酶切重組質粒:4.Xhol單酶切重組質粒;

1.2.4重組菌的誘導表達及SDSPAGE鑒定取誘導的重組菌裂解產物進行SDS.PAGE分析，考馬斯亮藍染色，脫色液脫色，同時取誘導的非重組的pGEx-6P，1菌體裂解物作為對照。結果表明(見圖1.3)，誘導的重組菌裂解產物在約42KD的位置出現(xiàn)一條特異性蛋白條帶，而誘導的非重組pGEX一6P一1菌體裂解物只在約26KD處出現(xiàn)一條與GST理論值一致的條帶。圖1.3重組菌體裂解產物SDS一PAGE鑒定Figurel.3SDS一PAGEanalysisoftherecOmbinantProteinexPressedinE.eoli低分子量標準蛋白質Marker;2.未經護TG誘導的重組質粒;3.未經IPTG誘導的非重組的pGEx一6P一1;4.經IPTG誘導的非重組的pGEx一6P一1;5.經IPTG誘導的重組質粒1。2一5間接免疫熒光法測定p42bCr-t從融合蛋白具有特異抗原性

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3042735