發(fā)布時間：2021-02-15 12:59

　　目的利用綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記人細胞間黏附分子-1（ICAM-1）,觀察GFP是否影響ICAM-1在細胞膜表面的定位,實現(xiàn)ICAM-1可視化。應(yīng)用原子力顯微鏡（AFM）單分子力譜研究ICAM-1/CD11b相互作用,并探討瑞舒伐他汀（RSV）及單抗類藥物干預(yù)的影響。方法從人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）中提取總RNA,設(shè)計合成PCR引物（兩端分別含有Bam HⅠ、HindⅢ特異性酶切位點）,使用RT-PCR擴增獲取ICAM-1cDNA編碼區(qū)序列,經(jīng)測序分析篩選正確序列,與pEGFP-N1表達載體相接,即得到基于GFP的重組質(zhì)粒pICAM-1-GFP,脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染COS-7細胞,通過熒光顯微鏡觀察融合蛋白pICAM-1-GFP在COS-7上的定位。AFM單分子力譜測量該細胞模型上單對黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值,應(yīng)用RSV及抗ICAM-1單克隆抗體干預(yù),檢測黏附力值是否有變化。結(jié)果序列分析RT-PCR擴增獲得的片段為人ICAM-1的cDNA編碼區(qū),pICAM-1-GFP發(fā)出綠色熒光定位于COS-7細胞表面。單對黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值約為42 ... 

【文章來源】：軍事醫(yī)學(xué). 2019,43(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁


本文編號：3034893