目的:探討臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）是否以外分泌的方式調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2極化表型,并且探討其機(jī)制。方法:提取原代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,并制備含有hUC-MSCs分泌的全部營(yíng)養(yǎng)因子的條件培養(yǎng)基（hUC-MSCs-CM）。實(shí)驗(yàn)分為:空白對(duì)照組,單純LPS刺激組,單純hUC-MSCs-CM刺激組,LPS、hUC-MSCs-CM共刺激組,刺激24 h后收集上清和蛋白。ELISA方法檢測(cè)上清中TNF-α、IL-6濃度,Western blot檢測(cè)CD86、精氨酸酶1（Arg1）、PI3K的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:①LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分泌TNF-α、IL-6因子增多,LPS、hUC-MSCs-CM共刺激組與LPS組相比,TNF-α、IL-6表達(dá)明顯降低（P <0. 05）;②LPS刺激組BV2細(xì)胞M1型標(biāo)志物CD86表達(dá)明顯增多,hUC-MSCs-CM共刺激組與LPS組相比CD86表達(dá)降低（P <0. 05）。LPS、hUC-MSCs-CM共刺激組M2型標(biāo)志物Arg1表達(dá)增多（P <0. 05）;③LPS、hUC-MSCs-CM共刺激組上調(diào)PI3K磷酸化水平（P <... 

【文章來源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019,35(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【圖文】：

顯微鏡下觀察第三代hUC-MSCs的形態(tài)特征(×100)

均一地表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的表面標(biāo)記CD73、CD90、CD105，不表達(dá)CD19，不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)記CD11b、CD34，不表達(dá)人類白細(xì)胞共同抗原CD45以及MHCⅡ類分子HLA-DＲ，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征(圖2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS對(duì)BV2分泌TNF-α和IL-6的影響與空白對(duì)照組相比，LPS組分泌TNF-α和IL-6明顯增高，LPS+MSCs組與單純LPS組相比TNF-α和IL-6水平明顯降低，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖3。圖1顯微鏡下觀察第三代hUC-MSCs的形態(tài)特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)圖2培養(yǎng)至第二代的hUC-MSCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen圖3BV2細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的變化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的M1和M2表型改變CD86為活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1型特異性標(biāo)志物，與空白對(duì)照組相比，LPS刺激24h后，CD86表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，但LPS+MSCs聯(lián)合刺激組與單純LPS組相比，CD86表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Arg1為M2型活化小膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，Western結(jié)果顯示MSCs組、LPS+MSCs組與空白對(duì)照組相比，Arg1蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖4、5。2.5hUC-MSCs-CM對(duì)PI3K信號(hào)通路的影響Western結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，MSCs組、LPS+MSCs組的PI3K磷酸化水平明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖6。圖4CD86蛋白表達(dá)水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*

HLA-DＲ，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征(圖2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS對(duì)BV2分泌TNF-α和IL-6的影響與空白對(duì)照組相比，LPS組分泌TNF-α和IL-6明顯增高，LPS+MSCs組與單純LPS組相比TNF-α和IL-6水平明顯降低，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖3。圖1顯微鏡下觀察第三代hUC-MSCs的形態(tài)特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)圖2培養(yǎng)至第二代的hUC-MSCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen圖3BV2細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的變化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的M1和M2表型改變CD86為活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1型特異性標(biāo)志物，與空白對(duì)照組相比，LPS刺激24h后，CD86表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，但LPS+MSCs聯(lián)合刺激組與單純LPS組相比，CD86表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Arg1為M2型活化小膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，Western結(jié)果顯示MSCs組、LPS+MSCs組與空白對(duì)照組相比，Arg1蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖4、5。2.5hUC-MSCs-CM對(duì)PI3K信號(hào)通路的影響Western結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，MSCs組、LPS+MSCs組的PI3K磷酸化水平明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見圖6。圖4CD86蛋白表達(dá)水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup.圖5Arg1蛋白表達(dá)水平Fig．5Arg1proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsothergroups.圖6PI3K蛋白表達(dá)水平Fig．6PI3Kproteine


本文編號(hào)：3031882