AAV-2是目前人類臨床研究中最有前途的基因治療載體之一。本論文報(bào)道了重組腺相關(guān)病毒rAAV-2的包裝生產(chǎn)、純化、檢測方法即生產(chǎn)平臺(tái)的建立及初步應(yīng)用。利用重組質(zhì)粒pAAV／EGFP與包裝／幫助質(zhì)粒pDG共轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞HEK293，生產(chǎn)重組的AAV病毒。純化后的病毒基于pAAV上的WPRE序列建立定量Realtime-PCR方法檢測rAAV滴度。結(jié)果顯示：與傳統(tǒng)的檢測AAV滴度的方法相比，qRealtime-PCR方法更為方便、快速、通用，而且提高了重復(fù)性和準(zhǔn)確性。使用兩種不同的純化方法—1)肝素柱純化法；2)氯仿純化法—純化粗產(chǎn)物獲得純度較高的重組腺相關(guān)病毒rAAV。比較二種方法：從兩種方法純化得來的重組腺相關(guān)病毒rAAV分別以不同滴度感染HEK293，觀察EGFP的表達(dá)。結(jié)果顯示：從感染活性看，兩種方法的純化產(chǎn)物活性相近；從經(jīng)濟(jì)、簡便、省時(shí)方面看，氯仿純化法優(yōu)于肝素柱純化法。 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)從肝癌病人血細(xì)胞中擴(kuò)增出能夠表達(dá)IFNa1的IFNA1cDNA，克隆到pAAV載體上進(jìn)行測序，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pAAV／IFNA1，轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，48小時(shí)后收獲細(xì)胞，Weste... 

【文章來源】：四川大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 rAAV-2生產(chǎn)平臺(tái)即AAV包裝生產(chǎn)、純化方法的的確立
    摘要
    引言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二章 rAAV／IFNA1病毒對(duì)AD38細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)
    摘要
    引言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    腺相關(guān)病毒AAV用于基因治療的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文
聲明


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種快速高效分離和純化重組腺病毒伴隨病毒載體的方法[J]. 吳小兵,董小巖,伍志堅(jiān),屈建國,侯云德.  科學(xué)通報(bào). 2000(19)
[2]具有AAV載體包裝功能的重組HSV的產(chǎn)生[J]. 伍志堅(jiān),吳小兵,侯云德.  科學(xué)通報(bào). 1999(05)



本文編號(hào)：3024279