發(fā)布時間：2017-04-12 22:16

  本文關鍵詞：以Ⅱ型單純皰疹病毒gD和UL25為免疫原的疫苗的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單純皰疹病毒(HSV-2)是一種世界范圍內流行的嗜神經性病毒,HSV-2感染主要由性行為產生的生殖道分泌物傳播,增加宮頸癌、陰莖癌、前列腺癌發(fā)病率,由于與HIV-1易于協同感染而提高了艾滋病的感染風險3~4倍。HSV-2最特殊的生物學特性包括潛伏和復發(fā)感染,在原發(fā)感染時能夠逃逸宿主的免疫反應,潛伏于中樞神經系統(tǒng)的背根神經節(jié),建立終身潛伏,反復發(fā)作,無法治愈。作為最易于復發(fā)的生殖器皰疹病毒,由HSV-2導致的生殖器感染主要有三個臨床階段:原發(fā)感染,復發(fā)感染以及亞臨床性感染[1]。目前針對復發(fā)感染以及亞臨床性感染均沒有有效的藥物療法,所以疫苗的研究對于預防HSV-2的原發(fā)感染,控制潛伏HSV-2導致的復發(fā)感染和病毒滲出,以及亞臨床性感染的傳播有很重要的意義。盡管目前沒有被批準上市的HSV-2疫苗,但多數臨床實驗結果證明HSV-2包膜糖蛋白g D作為介導病毒侵入宿主細胞的最關鍵蛋白,能夠誘導機體產生高水平的中和抗體,較強的細胞免疫應答,以及在動物水平上得到了較好的攻毒后保護力。很多臨床實驗結果也顯示了,細胞免疫應答在抑制病毒的潛伏,清除病毒和控制潛伏HSV-2導致的復發(fā)性感染的重要作用。HSV-2病毒的衣殼蛋白UL25被證明是能夠誘導高水平的T細胞免疫應答,UL25含有豐富的CD8+T細胞表位。腺病毒載體可高效地傳遞和表達基因,以腺病毒為載體的疫苗能有效的產生特異性高水平的中和抗體,腺病毒5型(Ad 5)是目前最常用的腺病毒包裝載體。本論文(1)在Balb/C動物模型上進行了攻毒劑量的摸索,確定了Balb/C致死攻毒劑量為1×10~5 PFU/只,并計算得到半數致死劑量為1.2×10~4 PFU/只。(2)構建并且成功包裝了r Ad-?UL25重組腺病毒載體疫苗,將其與r Ad-g D2,r Ad-g D2?UL25一起,與傳統(tǒng)滅活疫苗FI-HSV-2和藥物Acyclovir為對照,以Balb/C為預防性疫苗的攻毒動物模型,利用先免疫后攻毒的策略,比較各組別的免疫原性以及攻毒后保護力的差別。結果表明:10倍LD_50攻毒后,r Ad-g D2,r Ad-g D2?UL25均能夠誘導產生高水平的g D2特異性結合、中和抗體水平和干擾素-γ水平;r Ad-?UL25、r Ad-g D2?UL25能夠產生特異性針對于LP2的干擾素-γ水平;就攻毒后保護力而言,相比于其他幾組,r Ad-g D2?UL25呈現出最高的保護率以及最快的病毒清除速度。(3)在豚鼠動物模型上進行了攻毒劑量的摸索,確定了半數致死劑量為5.4×10~5 PFU/只。(4)以豚鼠作為治療性疫苗的攻毒動物模型,利用先攻毒后免疫的策略,評價了r Ad-?UL25、r Ad-g D2、r Ad-g D2?UL25、傳統(tǒng)滅活疫苗FI-HSV-2和藥物Acyclovir對照的攻毒后保護力以及HSV-2病毒清除和病毒的潛伏情況。結果顯示:r Ad-g D2?UL25在豚鼠模型中仍然表現出最高的保護率以及最快的病毒清除速度;r Ad-g D2呈現出稍高于FI-HSV-2的保護力,而r Ad-?UL25呈現陰性結果,說明了單獨免疫表位?UL25能夠誘導產生?UL25特異性的T細胞免疫應答卻無明顯的攻毒后保護力,單獨免疫表位g D2能夠誘導產生較好的g D特異性的免疫原性和保護力,效果卻低于r Ad-g D2?UL25;當?UL25和g D兩個表位偶聯進行免疫時,r Ad-g D2?UL25則表現出最強的免疫原性和最好的保護力。
【關鍵詞】：Ⅱ型單純皰疹病毒 治療性疫苗 Balb/C 豚鼠 腺病毒載體
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-25
• 1.1 Ⅱ型單純皰疹病毒與生殖器皰疹10-15
• 1.1.1 HSV-2 結構與功能11-12
• 1.1.2 HSV-2 的感染12-14
• 1.1.3 HSV-2 的潛伏14
• 1.1.4 HSV-2 免疫作用機制14-15
• 1.2 HSV-2 疫苗的研究現狀及其應用前景15-19
• 1.2.1 HSV-2 藥物治療現狀15-16
• 1.2.2 HSV-2 疫苗預防型疫苗16-18
• 1.2.3 HSV-2 疫苗治療型疫苗18-19
• 1.3 HSV-2 疫苗動物模型的研究19-21
• 1.4 腺病毒載體的應用21-22
• 1.5 免疫原gD與UL25的選擇22-23
• 1.6 論文的立體依據及設計23-25
• 1.6.1 立題依據與創(chuàng)新點23-24
• 1.6.2 實驗思路與設計24-25
• 第二章 實驗材料25-30
• 2.1 質粒、菌株、細胞株和病毒株25
• 2.2 相關引物的設計25-26
• 2.3 短肽26
• 2.4 主要試劑以及緩沖液配制方法26-28
• 2.5 主要儀器28-29
• 2.6 實驗動物29-30
• 第三章 預防型疫苗研究的實驗方法與結果分析30-58
• 3.1 預防型疫苗研究的實驗方法30-43
• 3.1.1 rAd-?UL25的構建、擴增、純化及鑒定30-37
• 3.1.2 預防性疫苗動物模型的建立37-38
• 3.1.3 預防型腺病毒載體疫苗Balb/C小鼠免疫實驗38-39
• 3.1.4 預防型疫苗免疫原性評價39-42
• 3.1.5 腺病毒載體疫苗Balb/C小鼠保護力實驗42-43
• 3.2 預防型疫苗研究的實驗結果與分析43-56
• 3.2.1 rAd-?UL25的構建、擴增、純化、鑒定及滴度測定43-48
• 3.2.2 預防性疫苗動物模型的建立48-49
• 3.2.3 預防型疫苗免疫原性評價49-53
• 3.2.4 預防型疫苗保護力研究53-56
• 3.3 預防型疫苗研究的討論56-58
• 第四章 治療性疫苗研究的實驗方法與結果58-67
• 4.1 治療性疫苗研究的實驗方法58-59
• 4.1.1 豚鼠模型攻毒劑量摸索和LD50的計算58
• 4.1.2 腺病毒載體疫苗豚鼠治療性免疫實驗58
• 4.1.3 病毒攻擊檢測生存率實驗以及病理評級58-59
• 4.1.4 生殖道病毒載量檢測實驗59
• 4.1.5 背根部神經節(jié)病毒載量檢測實驗59
• 4.2 治療性疫苗研究的實驗結果59-65
• 4.2.1 豚鼠攻毒模型的建立59-61
• 4.2.2 治療型疫苗保護力研究61-65
• 4.3 治療性疫苗研究的討論65-67
• 全文結論67-68
• 參考文獻68-71
• 作者簡介71-72
• 致謝72

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1 王紫琰;以Ⅱ型單純皰疹病毒gD和UL25為免疫原的疫苗的研究[D];吉林大學;2016年

  本文關鍵詞：以Ⅱ型單純皰疹病毒gD和UL25為免疫原的疫苗的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：302181