BAFF（B-cell-activating factor），又稱BLyS，TALL-1，THANK，zTNF4或TNFSF-13B，是1999年發(fā)現(xiàn)的TNF家族成員。研究發(fā)現(xiàn)，BAFF能促進B細胞的存活和成熟，在體液免疫中發(fā)揮重要作用，BAFF過表達會導致自身免疫性疾病。BAFF有三個受體，分別為BCMA、TACI、BAFF-R／BR3。其中BAFF-R被認為是最主要的受體。BAFF-R介導細胞內(nèi)的替代NF-κB途徑，BAFF三聚體誘導BAFF-R在膜上聚集，通過募集TRAF3接頭分子，激活NF-κB。我們以BAFF-R／TRAF3復合物為研究對象，篩選促BAFF-R／TRAF3解離的小肽，阻斷BAFF-R介導的信號通路，可以為自身免疫性疾病的治療提供新的靶點。研究工作的結(jié)果可概括為以下幾個方面： （1） 通過RT-PCR方法釣取BAFF-R胞內(nèi)區(qū)和TRAF3 C端258～568aa的cDNA片段，構(gòu)建重組質(zhì)粒pBD-BAFF-R和pAD-TRAF3-C，利用酵母雙雜交驗證了兩者的相互作用。構(gòu)建pM-BAFF-R和pVP16-TRAF-C表達載體，共轉(zhuǎn)染COS-7細胞，利用哺乳... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

重組載體pBD一BAFF一R構(gòu)建示意圖

RAF3相互作用的研究圖2重組載體pAD一TRAF3一c構(gòu)建示意圖2實驗結(jié)果2.1獲得Raji細胞總NRA利用總RNA提取試劑盒提取Raji細胞總RNA。的純度進行分析鑒定，電泳結(jié)果顯示285、185和55利用甲醛變性電泳對RNA，條帶清晰(圖3)。

2.3pBD一ABFF一R和pA--DTARF3一c重組質(zhì)粒鑒定和序列分析將重組質(zhì)粒pBD一BAFF一R用五七。Rl和BamHI雙酶切，pAD一TRAF3一C用BamHI和五乞口Rl雙酶切，分別得到約258Pb和936bp的片段(圖6)，序列分析表明釣取的BAFF一R胞內(nèi)區(qū)與TRAF3一C序列與文獻報道一致(圖7一11)。43Moo0︺75050025020001000936卜p258Pb500250圖6重組質(zhì)粒BPD一BAFF一R、pAD一TRAF3￡的酶切鑒定電泳圖M.DLZo00分子量標準;l.姆D一AFF一雙酶切產(chǎn)物;2.聲D一BAFF一R3.APD一ARF3一c4.pAD一TRAF3一C雙酶切產(chǎn)物;圖7獲得的BAFF一R胞內(nèi)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]用改進的重疊區(qū)擴增基因拼接法構(gòu)建中間缺失突變體[J]. 李成華,房海燕,鄧小云,夏昆,鄭多,夏家輝.  中華醫(yī)學遺傳學雜志. 2004(01)



本文編號：2998983