目的對小鼠Lewis肺癌（LLC）細胞與旋毛蟲（Trichinella spiralis）相關(guān)抗原基因sHSPs進行原核表達,對表達產(chǎn)物進行抗原性鑒定。方法利用噬菌體文庫展示技術(shù)篩選旋毛蟲與LLC細胞相關(guān)抗原基因并分析,獲得sHSPs（DQ 986457）基因。以旋毛蟲cDNA為模板,PCR擴增sHSPs基因,連接至表達載體pET-32a（+）后轉(zhuǎn)化入感受態(tài)BL21（DE3）,以IPTG誘導表達,采用SDS-PAGE和Western blot鑒定重組蛋白的表達及其反應原性。結(jié)果重組表達質(zhì)粒pET-32a（+）-sHSPs經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明克隆載體構(gòu)建正確,SDS-PAGE檢測其表達重組蛋白相對分子質(zhì)量約為36×10³。Western blot檢測重組蛋白可被抗LLC細胞多抗血清識別。結(jié)論成功構(gòu)建了pET-32a（+）-sHSPs克隆載體,其表達的重組蛋白可與抗LLC細胞多抗血清反應即具有反應原性,為該蛋白的研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國病原生物學雜志. 2019,14(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 載體、菌株、蟲株和細胞
        1.2 主要試劑和儀器
    2 方法
        2.1 LLC細胞與旋毛蟲相關(guān)抗原基因的篩選
        2.2 引物設(shè)計合成
        2.3 sHSPs基因的擴增
        2.4 pET-32a （+） -sHSPs表達載體的構(gòu)建
        2.5 pET-32a （+） -sHSPs的誘導表達
        2.6 pET-32a （+） -sHSPs表達產(chǎn)物的鑒定
結(jié) 果
    1 旋毛蟲與LLC細胞相關(guān)抗原基因的篩選
    2 sHSPs基因的擴增
    3 pET-32a （+） -sHSPs表達載體的構(gòu)建與鑒定
    4 pET-32a （+） -sHSPs的表達及鑒定
討 論



本文編號：2990180