目的 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）結(jié)合反向雜交技術(shù)研制性病病原體低密度基因芯片。 方法 將淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、白色念珠菌以及人類免疫缺陷病毒-1（HIV-1）SF2株env基因的種特異性探針加尾后固定在尼龍膜上。將上述5種性病病原體的標(biāo)準(zhǔn)菌株提取DNA后采用細(xì)菌、真菌以及人類免疫缺陷病毒三組通用引物分別行PCR擴(kuò)增，在擴(kuò)增過程中用Bio-16-dUTP標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物，將上述擴(kuò)增產(chǎn)物變性后分別與點(diǎn)有5種探針的尼龍膜反向雜交；將來源于臨床的性病病原體標(biāo)本提取DNA后與上述三組通用引物在一個PCR反應(yīng)體系內(nèi)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增過程中用Bio-16-dUTP標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物變性后與點(diǎn)有5種探針的尼龍膜反向雜交。 結(jié)果 對淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體的標(biāo)準(zhǔn)菌株行PCR擴(kuò)增，均出現(xiàn)520bp長度的DNA片段，對白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株行PCR擴(kuò)增出現(xiàn)350bp的條帶，對HIV-1SF2株env基因行PCR擴(kuò)增出現(xiàn)167bp長度的DNA片段，敏感性試驗(yàn)可檢出20fg的菌體DNA；5種性病病原體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，與膜上點(diǎn)有5種探針的尼龍膜雜交，結(jié)果在各自特異性探針的位置上出... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 探針的制備
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化
        2.3.3 性病病原體低密度基因芯片的臨床應(yīng)用
3 結(jié)果
    3.1 淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、白色念珠菌、HIV-1SF2 PCR產(chǎn)物克隆后的PCR、酶切電泳鑒定
    3.2 用三套通用引物分別擴(kuò)增5種標(biāo)準(zhǔn)性病病原體DNAPCR產(chǎn)物電泳圖譜
    3.3 反向斑點(diǎn)雜交的結(jié)果
    3.4 反向斑點(diǎn)雜交的敏感性
    3.5 PCR反應(yīng)的廣譜性和特異性
    3.6 常規(guī)方法與基因芯片法檢測臨床標(biāo)本的檢出率比較
4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
綜述
綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：2965045