甲型肝炎病毒的提取及免疫學性質分析
發(fā)布時間：2021-01-03 02:22
目的建立甲型肝炎病毒（hepatitis A virus, HAV）的提取方法,了解和掌握HAV的免疫學性質。方法利用人胚肺二倍體細胞培養(yǎng)并收獲HAV,用層析純化等方法提取HAV,然后通過抗原檢測、免疫電鏡檢查以及小鼠免疫試驗對HAV的免疫學性質進行檢測和分析。結果利用層析純化等方法提取HAV,抗原回收率達84%以上,蛋白去除率達97%以上,電鏡及免疫電鏡檢查可以觀測到典型的HAV以及HAV+IgM抗原抗體免疫復合物和HAV+IgG抗原抗體免疫復合物,免疫小鼠抗體陽轉率為100%。結論利用層析純化等方法可以對HAV進行有效提取,提取的HAV具有良好的免疫反應性和免疫原性。
【文章來源】：微生物學免疫學進展. 2019年04期
【文章頁數】：6 頁
【部分圖文】：
陰離子交換層析圖譜注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl
5、1．00mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果均為陰性(－)，見表2。表明HAV抗原主要存在于0．50、0．75mol/LNaCl洗脫峰中。注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl。圖1陰離子交換層析圖譜Fig．1Theprofileforanion-exchangechromatography2．3陰離子交換層析和分子篩層析純化試驗樣品進行第二次陰離子交換層析，分別使用0．02mol/LPB、0．25mol/LNaCl、0．75mol/LNaCl溶液進行洗脫，形成3個洗脫峰，見圖2;分別收取各個洗脫峰表2陰離子交換層析抗原含量檢測結果Tab．2Theantigencontentsextractedbyanion-exchangechromatography洗脫順序洗脫液洗脫峰中抗原含量(EL．U．/mL)①0．02mol/LPB緩沖液(－)②0．25mol/LNaCl溶液(－)③0．50mol/LNaCl溶液640④0．75mol/LNaCl溶液1280⑤1．00mol/LNaCl溶液(－)注:⑥．0．02mol/LPB;⑦．0．25mol/LNaCl;⑧．0．75mol/LNaCl。圖2第二次陰離子交換層析圖譜Fig．2Theprofileforsecondanion-exchangechromatography微生物學免疫學進展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·92·
溶液，進行抗原含量檢測，結果顯示:陰離子交換層析后，在0．75mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果為2560EL．U．/mL，在0．02mol/LPB和0．25mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果為陰性(－)。再將0．75mol/LNaCl洗脫峰進行分子篩層析純化，使用0．01mol/LPBS進行洗脫，形成2個洗脫峰，見圖3;分別收取各個洗脫峰溶液，進行抗原含量檢測，結果顯示:分子篩層析經0．01mol/LPBS洗脫后，第1峰中抗原檢測結果為1280EL．U．/mL，第2峰中抗原檢測結果為陰性(－)，見表3。注:⑨．0．01mol/LPBS洗脫第1峰;⑩．0．01mol/LPBS洗脫第2峰。圖3分子篩層析圖譜Fig．3Theprofileforgelfiltration表3第二次陰離子交換層析和分子篩層析抗原含量檢測結果Tab．3Theantigencontentsextracedbysecondanion-exchangechromatographyandgelfiltration層析種類洗脫峰抗原含量(EL．U．/mL)陰離子交換層析0．02mol/LPB洗脫峰(－)陰離子交換層析0．25mol/LNaCl洗脫峰(－)陰離子交換層析0．75mol/LNaCl洗脫峰2560分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫1峰1280分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫2峰(－)2．4HAV抗原樣品的制備使用的3批病毒收獲物的體積分別為200、400、600mL;抗原含量均為10240EL．U．/mL;蛋白質質量濃度分別為866．9、773．1和960．6μg/mL。制備的3批HAV抗原試驗樣品分別為HAVAgS01、HAVAgS02和HAVAgS03;體積分別為1350、2850和4200mL;抗原含量均為1280EL．U．/mL;蛋白質質量濃度分別為2．7、2．4和2．9μg/mL�？乖厥章史謩e為84．38%、89．06%和87．50%;蛋?
【參考文獻】：
期刊論文
[1]甲型肝炎疫苗接種的流行病學效果評價[J]. 李淑芳,左志平,李浩,李然,婁紅敏. 醫(yī)學動物防制. 2016(02)
[2]甲型肝炎疫苗應用后甲型肝炎流行特征的變遷[J]. 邱寧,劉學恩,莊輝. 中國病毒病雜志. 2012(05)
本文編號：2954125
【文章來源】：微生物學免疫學進展. 2019年04期
【文章頁數】：6 頁
【部分圖文】：
陰離子交換層析圖譜注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl
5、1．00mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果均為陰性(－)，見表2。表明HAV抗原主要存在于0．50、0．75mol/LNaCl洗脫峰中。注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl。圖1陰離子交換層析圖譜Fig．1Theprofileforanion-exchangechromatography2．3陰離子交換層析和分子篩層析純化試驗樣品進行第二次陰離子交換層析，分別使用0．02mol/LPB、0．25mol/LNaCl、0．75mol/LNaCl溶液進行洗脫，形成3個洗脫峰，見圖2;分別收取各個洗脫峰表2陰離子交換層析抗原含量檢測結果Tab．2Theantigencontentsextractedbyanion-exchangechromatography洗脫順序洗脫液洗脫峰中抗原含量(EL．U．/mL)①0．02mol/LPB緩沖液(－)②0．25mol/LNaCl溶液(－)③0．50mol/LNaCl溶液640④0．75mol/LNaCl溶液1280⑤1．00mol/LNaCl溶液(－)注:⑥．0．02mol/LPB;⑦．0．25mol/LNaCl;⑧．0．75mol/LNaCl。圖2第二次陰離子交換層析圖譜Fig．2Theprofileforsecondanion-exchangechromatography微生物學免疫學進展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·92·
溶液，進行抗原含量檢測，結果顯示:陰離子交換層析后，在0．75mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果為2560EL．U．/mL，在0．02mol/LPB和0．25mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測結果為陰性(－)。再將0．75mol/LNaCl洗脫峰進行分子篩層析純化，使用0．01mol/LPBS進行洗脫，形成2個洗脫峰，見圖3;分別收取各個洗脫峰溶液，進行抗原含量檢測，結果顯示:分子篩層析經0．01mol/LPBS洗脫后，第1峰中抗原檢測結果為1280EL．U．/mL，第2峰中抗原檢測結果為陰性(－)，見表3。注:⑨．0．01mol/LPBS洗脫第1峰;⑩．0．01mol/LPBS洗脫第2峰。圖3分子篩層析圖譜Fig．3Theprofileforgelfiltration表3第二次陰離子交換層析和分子篩層析抗原含量檢測結果Tab．3Theantigencontentsextracedbysecondanion-exchangechromatographyandgelfiltration層析種類洗脫峰抗原含量(EL．U．/mL)陰離子交換層析0．02mol/LPB洗脫峰(－)陰離子交換層析0．25mol/LNaCl洗脫峰(－)陰離子交換層析0．75mol/LNaCl洗脫峰2560分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫1峰1280分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫2峰(－)2．4HAV抗原樣品的制備使用的3批病毒收獲物的體積分別為200、400、600mL;抗原含量均為10240EL．U．/mL;蛋白質質量濃度分別為866．9、773．1和960．6μg/mL。制備的3批HAV抗原試驗樣品分別為HAVAgS01、HAVAgS02和HAVAgS03;體積分別為1350、2850和4200mL;抗原含量均為1280EL．U．/mL;蛋白質質量濃度分別為2．7、2．4和2．9μg/mL�？乖厥章史謩e為84．38%、89．06%和87．50%;蛋?
【參考文獻】：
期刊論文
[1]甲型肝炎疫苗接種的流行病學效果評價[J]. 李淑芳,左志平,李浩,李然,婁紅敏. 醫(yī)學動物防制. 2016(02)
[2]甲型肝炎疫苗應用后甲型肝炎流行特征的變遷[J]. 邱寧,劉學恩,莊輝. 中國病毒病雜志. 2012(05)
本文編號：2954125
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