目的建立甲型肝炎病毒（hepatitis A virus, HAV）的提取方法,了解和掌握HAV的免疫學(xué)性質(zhì)。方法利用人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)并收獲HAV,用層析純化等方法提取HAV,然后通過抗原檢測(cè)、免疫電鏡檢查以及小鼠免疫試驗(yàn)對(duì)HAV的免疫學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)和分析。結(jié)果利用層析純化等方法提取HAV,抗原回收率達(dá)84%以上,蛋白去除率達(dá)97%以上,電鏡及免疫電鏡檢查可以觀測(cè)到典型的HAV以及HAV+IgM抗原抗體免疫復(fù)合物和HAV+IgG抗原抗體免疫復(fù)合物,免疫小鼠抗體陽轉(zhuǎn)率為100%。結(jié)論利用層析純化等方法可以對(duì)HAV進(jìn)行有效提取,提取的HAV具有良好的免疫反應(yīng)性和免疫原性。 

【文章來源】：微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2019年04期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

陰離子交換層析圖譜注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl

5、1．00mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測(cè)結(jié)果均為陰性(－)，見表2。表明HAV抗原主要存在于0．50、0．75mol/LNaCl洗脫峰中。注:①．0．02mol/LPB;②．0．25mol/LNaCl;③．0．50mol/LNaCl;④．0．75mol/LNaCl;⑤．1．00mol/LNaCl。圖1陰離子交換層析圖譜Fig．1Theprofileforanion-exchangechromatography2．3陰離子交換層析和分子篩層析純化試驗(yàn)樣品進(jìn)行第二次陰離子交換層析，分別使用0．02mol/LPB、0．25mol/LNaCl、0．75mol/LNaCl溶液進(jìn)行洗脫，形成3個(gè)洗脫峰，見圖2;分別收取各個(gè)洗脫峰表2陰離子交換層析抗原含量檢測(cè)結(jié)果Tab．2Theantigencontentsextractedbyanion-exchangechromatography洗脫順序洗脫液洗脫峰中抗原含量(EL．U．/mL)①0．02mol/LPB緩沖液(－)②0．25mol/LNaCl溶液(－)③0．50mol/LNaCl溶液640④0．75mol/LNaCl溶液1280⑤1．00mol/LNaCl溶液(－)注:⑥．0．02mol/LPB;⑦．0．25mol/LNaCl;⑧．0．75mol/LNaCl。圖2第二次陰離子交換層析圖譜Fig．2Theprofileforsecondanion-exchangechromatography微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·92·

溶液，進(jìn)行抗原含量檢測(cè)，結(jié)果顯示:陰離子交換層析后，在0．75mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測(cè)結(jié)果為2560EL．U．/mL，在0．02mol/LPB和0．25mol/LNaCl洗脫峰中抗原檢測(cè)結(jié)果為陰性(－)。再將0．75mol/LNaCl洗脫峰進(jìn)行分子篩層析純化，使用0．01mol/LPBS進(jìn)行洗脫，形成2個(gè)洗脫峰，見圖3;分別收取各個(gè)洗脫峰溶液，進(jìn)行抗原含量檢測(cè)，結(jié)果顯示:分子篩層析經(jīng)0．01mol/LPBS洗脫后，第1峰中抗原檢測(cè)結(jié)果為1280EL．U．/mL，第2峰中抗原檢測(cè)結(jié)果為陰性(－)，見表3。注:⑨．0．01mol/LPBS洗脫第1峰;⑩．0．01mol/LPBS洗脫第2峰。圖3分子篩層析圖譜Fig．3Theprofileforgelfiltration表3第二次陰離子交換層析和分子篩層析抗原含量檢測(cè)結(jié)果Tab．3Theantigencontentsextracedbysecondanion-exchangechromatographyandgelfiltration層析種類洗脫峰抗原含量(EL．U．/mL)陰離子交換層析0．02mol/LPB洗脫峰(－)陰離子交換層析0．25mol/LNaCl洗脫峰(－)陰離子交換層析0．75mol/LNaCl洗脫峰2560分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫1峰1280分子篩層析0．01mol/LPBS洗脫2峰(－)2．4HAV抗原樣品的制備使用的3批病毒收獲物的體積分別為200、400、600mL;抗原含量均為10240EL．U．/mL;蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度分別為866．9、773．1和960．6μg/mL。制備的3批HAV抗原試驗(yàn)樣品分別為HAVAgS01、HAVAgS02和HAVAgS03;體積分別為1350、2850和4200mL;抗原含量均為1280EL．U．/mL;蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度分別為2．7、2．4和2．9μg/mL。抗原回收率分別為84．38%、89．06%和87．50%;蛋?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2954125