基因工程產品的生產是一項十分復雜的系統(tǒng)工程，可分為上游和下游兩個階段，以分離目的基因、構建工程菌為主要內容的上游工藝是研制基因工程產品必不可少的基礎，而作為下游工藝核心內容的工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)、目的蛋白的分離純化卻直接控制著整個基因工程產品的質量、產量。本課題利用基因工程技術，重點從基因工程下游階段著手研究，利用最新現代生物技術研究并建立經優(yōu)化的高密度發(fā)酵工藝模式及高效分離純化包涵體重組蛋白模式。 一．研究并建立一種適于目的蛋白高效表達的高密度發(fā)酵工藝模式 高密度發(fā)酵中，人們最關心的問題主要是質粒穩(wěn)定性的維持、外源基因的高效表達及對下游純化的影響。針對這些問題，我們采用分批補料培養(yǎng)的方法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方及部分發(fā)酵條件，探索出即適于外源基因高效表達，又利于產品純化的發(fā)酵工藝。以我室構建并穩(wěn)定表達的重組質粒pBV220-γ-IFN、pBV220-HGFα、pBV220-HGFβ、pBV220-hPK5為模型，分別從不同的表達宿主菌中篩選出一種適合大規(guī)模生產的菌種BL21（DE3），該工程菌株連續(xù)傳代100代表達質粒不丟失，表達量穩(wěn)定；采用B.Braun公司的BIOSTAT-C1... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 基因工程菌高密度發(fā)酵工藝的研究
    前言
    材料
    方法
    結果
    討論
第二部分 包涵體重組蛋白純化工藝的研究
    前言
    材料
    方法
    結果
    討論
參考文獻
綜述
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]從包涵體中純化重組人幽門螺桿菌尿素酶B亞單位[J]. 王縛鯤,鄒全明,張衛(wèi)軍,田文標,朱永紅,楊珺,毛旭虎.  中國生物制品學雜志. 2002(01)
[2]重組人干擾素α2b包涵體純化方法的研究[J]. 楊欣,曾獻武,嚴君喜,王艷.  中國生化藥物雜志. 2001(06)
[3]包涵體蛋白體外復性的研究進展[J]. 方敏,黃華樑.  生物工程學報. 2001(06)
[4]包含體蛋白質的復性研究進展[J]. 寧云山,李妍,王小寧.  生物技術通訊. 2001(03)
[5]精制地鼠腎細胞狂犬病疫苗純化工藝的建立[J]. 呂宏亮,宋繼萍,鄒勇,王玉琳,周書全.  生物技術通訊. 2001(03)
[6]重組包涵體蛋白質的折疊復性[J]. 馮小黎.  生物化學與生物物理進展. 2001(04)
[7]新型重組人腫瘤壞死因子工程菌的發(fā)酵工藝研究[J]. 顏真,張英起,李民,陳常慶.  中國生化藥物雜志. 2001(02)
[8]分泌型重組人生長激素工程菌的高密度發(fā)酵[J]. 李武平,王志武,朱麗娜,張雪梅,劉麗軍,劉柱,盛君,郝淑美,孫宏,向澤敏.  中國生物制品學雜志. 2000(03)
[9]人白細胞介素18在大腸桿菌中的表達、純化和復性[J]. 裴冬生,胡書群,趙惠仁.  生物化學與生物物理學報. 2000(04)
[10]重組人肝增強因子工程菌JM109的發(fā)酵工藝研究[J]. 李茹冰,單中元,付泳航,楊聯(lián)萍,易學瑞,孔祥平.  中國生化藥物雜志. 2000(02)



本文編號：2949732