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球形幽門螺桿菌高表達(dá)基因的篩選及其克隆與真核表達(dá)

發(fā)布時(shí)間:2020-12-26 23:13
  目的:從基因轉(zhuǎn)錄水平了解球形幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)基因表達(dá)的變化,選擇在球形菌中相對(duì)高表達(dá)的兩個(gè)基因克隆入真核表達(dá)載體并檢測(cè)其表達(dá),為抗球形菌DNA疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。 方法:1.幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)株NCTC11637和2株臨床分離株,經(jīng)抗生素—滅滴靈誘導(dǎo)球變。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA,RT-PCR擴(kuò)增Hp 25種基因,這些基因包括毒力基因(kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、sodB、ureB、glmM、cagA、vacA、fldA、iceAl、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ);看家基因(scoB、atpD、glnA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因(hopW、hopX)。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)分子定量成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描定量。2.選擇表達(dá)變化較小的兩個(gè)基因(即相對(duì)高表達(dá)基因)glmM、oipA,將其全長(zhǎng)基因克隆入T載體進(jìn)行序列測(cè)定,再將其開放讀碼框架(ORF)克隆入真核表達(dá)載體pVAX1。重組質(zhì)粒glmM/pVAX1、oipA/pVAX1經(jīng)大量擴(kuò)增后,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901,用pSE... 

【文章來源】:福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】:57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 球形與螺旋形幽門螺桿菌基因表達(dá)差異比較
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 幽門螺桿菌毒力基因oipA和glmM的克隆及真核表達(dá)
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝



本文編號(hào):2940620

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