人博卡病毒1型（Human bocavirus 1,HBoV1）非結構蛋白NS1是多功能蛋白,對病毒復制有重要作用,同時可誘導宿主細胞凋亡。在研究NS1蛋白功能時,降低NS1蛋白對宿主細胞的毒性作用是急需解決的問題�；诖�,文中建立了可調(diào)控表達HBoV1非結構蛋白NS1的穩(wěn)定細胞系。構建NS1重組慢病毒質(zhì)粒（含可調(diào)控啟動子）,應用轉(zhuǎn)染試劑將NS1重組慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細胞。通過嘌呤霉素篩選抗性細胞、多西環(huán)素誘導NS1表達,建立可穩(wěn)定表達NS1-100、NS1-70蛋白的HEK 293T細胞系,利用熒光標記蛋白和Western blotting檢測,確定NS1蛋白的表達。并在穩(wěn)定表達NS1細胞系中轉(zhuǎn)染HBoV1啟動子-熒光素酶基因的質(zhì)粒,分析NS1的反式轉(zhuǎn)錄激活活性。結果表明NS1蛋白可在建立的細胞系中穩(wěn)定表達,且穩(wěn)定表達NS1蛋白對HBoV1啟動子有較強的激活活性,為進一步研究非結構蛋白NS1的功能及人博卡病毒致病機理奠定了良好的基礎。 

【文章來源】：生物工程學報. 2019年06期 北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、細胞及主要試劑
    1.2 重組慢病毒質(zhì)粒pLVX-NS1-100和pLVX-NS1-70的構建
    1.3 CCK-8測定細胞活性
    1.4 重組慢病毒的包裝
    1.5 病毒滴度的測定
    1.6 嘌呤霉素 （Puro） 工作濃度的確定
    1.7 穩(wěn)定表達NS1-100和NS1-70細胞系的篩選
    1.8 NS1-100和NS1-70的反式轉(zhuǎn)錄激活活性檢測
2 結果與分析
    2.1 重組質(zhì)粒pLVX-NS1-70和pLVX-NS1-100的構建及鑒定
    2.2 藥物對HEK 293T細胞活性影響
    2.3 DOX誘導NS1蛋白表達對細胞活性的影響
    2.4 穩(wěn)定表達NS1-70或NS1-100細胞系的建立和鑒定
    2.5 NS1蛋白反式轉(zhuǎn)錄激活活性檢測
3 討論



本文編號：2932336