發(fā)布時間：2020-12-15 19:20

　　抗原特異性細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs）的鑒定是研究CTL疫苗的基礎(chǔ)。定量分析抗原特異性T細(xì)胞能為免疫應(yīng)答的發(fā)生過程提供重要的信息。傳統(tǒng)的鑒定方法費時費力,敏感性低,近年來出現(xiàn)了一種新的檢測方法,即可溶性HLA肽四聚體方法。實驗表明,該方法克服已有檢測手段的缺點和局限性,這種四價的重組分子在體外可有效標(biāo)記T細(xì)胞抗原識別受體（TCR）,并適用于流式細(xì)胞儀檢測CTLs,由于該技術(shù)應(yīng)用原核表達重組蛋白,其來源容易,僅需不同的抗原肽就可制備重組分子,因此近期得到了廣泛應(yīng)用。本實驗旨在國內(nèi)率先建立可溶性HLA-A2-CEA四聚體檢測系統(tǒng),為腫瘤的細(xì)胞免疫機制研究提供一個方便、準(zhǔn)確的研究平臺。研究內(nèi)容如下:一、PCR-SSP結(jié)合測序分析快速篩選HLA-A*0201亞等位基因成功建立相對簡單經(jīng)濟的檢測HLA-A*0201等位基因的方法,利用位點特異性引物進行2-3次PCR擴增,結(jié)合PCR產(chǎn)物測序即可快速篩選HLA-A*0201陽性的個體,滿足我們所構(gòu)建的HLA-A2表位肽四聚復(fù)合物檢測系統(tǒng)進一步實驗的需要。本研究不僅創(chuàng)建了篩選特定等位基因——HLA-... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

2細(xì)胞株HLA-A位點擴增圖

1 T2 細(xì)胞株 HLA-A 位點擴增圖 圖 2 T2 細(xì)胞株 HLA-A2 位點擴增 30 個臨床血樣并設(shè)立對照 30 份血樣設(shè)立陰性對照，以確定的 PCR 反應(yīng)條件篩選出 7 份 HLA性產(chǎn)物共同收集電泳（見圖 3~5）。986bp1000bp10 9 8 7 6 5 4 3 2 1100bp DNAMarker陰性對照T2 細(xì)胞株 HLA-A 位點擴增（引物 P1、P2）1. 100bp DNAMarker2. 陰性對照3. T2 細(xì)胞株 HLA-A2 位點擴增4. T2 細(xì)胞株 HLA-A2 位點擴增

-A 位點擴增圖 圖 2 T2樣并設(shè)立對照陰性對照，以確定的 PCR 反應(yīng)條集電泳（見圖 3~5）。500bp200bp10 9 8 7 6 5 4 3 2 1er 位點擴增（引物 P1、P2）1. 100bp 2. 陰性對3. T2 細(xì)胞4. T2 細(xì)胞

【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組包涵體蛋白質(zhì)的折疊復(fù)性[J]. 馮小黎.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2001(04)
[2]蛋白質(zhì)復(fù)性[J]. 史晉輝.  生命的化學(xué). 2000(06)
[3]地高辛標(biāo)記PCR-SSOP法進行HLA-A*02等位基因檢測[J]. 翟寧,韓秀萍,賀衛(wèi)東,宋芳吉.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2000(03)
[4]綠色熒光蛋白與H-2Kb融合基因的構(gòu)建及表達[J]. 錢書兵,陳詩書.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2000(03)



本文編號：2918781