目的:構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白（EGFP）報告基因的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子121(hVEGF₁₂₁)的真核表達(dá)質(zhì)粒并在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中表達(dá)。測定表達(dá)hVEGF₁₂₁/EGFP融合蛋白的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及空白骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同時間段的缺氧后VEGF的表達(dá)水平,探討二者的區(qū)別和意義。方法:一、設(shè)計帶酶切位點(diǎn)的hVEGF₁₂₁全長擴(kuò)增引物。正義引物5’端加接XhoⅠ酶切位點(diǎn),反義引物5’端加接EcoRⅠ酶切位點(diǎn)。使用該引物通過PCR技術(shù)擴(kuò)增pCD2/ hVEGF₁₂₁質(zhì)粒中的hVEGF₁₂₁編碼基因全序列。將PCR產(chǎn)物即帶有相應(yīng)酶切位點(diǎn)的hVEGF₁₂₁編碼片段,以及載體質(zhì)粒pEGFP-N₂用XhoⅠ、EcoRⅠ限制性核酸內(nèi)切酶酶切后,再以粘端連接克隆法將hVEGF₁₂₁編碼片段定向連接入載體pEGFP-N₂的多克隆位點(diǎn)中,構(gòu)建成pEGFP-N₂-hVEGF_121... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

XhoI、EcoRI雙酶切鑒定100bp

HincII酶切鑒定500bp100bp250bp

測序結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠心臟的遷移及分化[J]. 牛麗麗,鄭敏,曹豐,謝超,李海民,岳文,高艷紅,白慈賢,祝善俊,裴雪濤.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2004(01)



本文編號：2905677