為探討卵透明帶DNA疫苗誘發(fā)輸卵管局部粘膜免疫以阻斷受精從而避免全身性免疫引起卵巢功能紊亂的可行性，本研究首先采用PCR法獲得了去除N端信號肽序列和C端跨膜區(qū)序列的豬卵透明帶ZP3 α（pZP3 α）的cDNA序列片段，以用于發(fā)展DNA疫苗的質(zhì)粒pVAX1為載體構(gòu)建了真核細胞表達質(zhì)粒pVAX1-pZP3 α。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將之導入HeLa細胞進行體外瞬時表達，采用RT-PCR和間接免疫熒光技術(shù)（IIF）檢測到了pZP3 α在HeLa細胞中的表達。然后，用殼聚糖C390包裹pVAX1-pZP3 α重組質(zhì)粒成功制備成納米微球，用原子力顯微鏡（AFM）觀察殼聚糖-DNA微球的形態(tài)結(jié)構(gòu)，其直徑為100納米到300納米不等，平均為224.6nm，形狀為球形、橢圓形等，并且測定微球?qū)χ亟M質(zhì)粒DNA的包裹率達90％以上。將該微球體外轉(zhuǎn)染HeLa細胞，用IIF法檢測到了pZP3 α的表達。接著，以灌胃方式將這些DNA疫苗微球喂食小鼠，喂食五天后通過RT-PCR和IIF檢測到了此DNA疫苗在小鼠小腸粘膜層細胞中的表達。殼聚糖／pVAX1-pZP3 α微球口服免疫小鼠后可以激發(fā)抗ZP3 IgA抗體反應(yīng)，在... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因片斷的PCR產(chǎn)物電泳圖譜

圖3.2對重組質(zhì)粒進行雙酶切和PCR鑒定的結(jié)果NAmarxer:LaneZ，pzssPeR擴增產(chǎn)物;p3。重組質(zhì)粒pCR擴增產(chǎn)物;Lane4，p、，Axl空載體pCR擴增產(chǎn)物;P3。質(zhì)粒經(jīng)Pstl儀ba一雙酶切;Lane6.pVAx】~pZp3。重組質(zhì)粒;載體.

RT-PCR檢測pZP3


本文編號：2900893