乙型肝炎是一種世界范圍的流行性傳染病,但目前還沒有有效的治療手段,因此預(yù)防是防治乙型肝炎的重點。血源性抗乙肝表面抗原抗體可用于乙型肝炎的被動免疫,防止乙型肝炎的母嬰垂直傳播。但是,血源性抗體的來源有限且具有潛在的傳染性,給它的應(yīng)用帶來限制。開發(fā)重組人源性抗HBsAg抗體,可以實現(xiàn)抗體的工程化大規(guī)模生產(chǎn),而且使用安全,可以彌補血源性抗體的缺陷,取代血源性抗體,因此具有良好的社會效益和經(jīng)濟效益。 我們將針對HBsAg preS2區(qū)表位的人源性單鏈抗體基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達,表達量可達菌體總蛋白的30%,并且目的蛋白在胞內(nèi)形成包涵體。經(jīng)Ni離子金屬螯合親和層析、凝膠層析兩步純化,重組抗體的純度達到97%。將純化后的單鏈抗體進行了復(fù)性。在優(yōu)化復(fù)性方法后,在抗體濃度為0.34mg/mL時,蛋白收率可達50%。而且復(fù)性后的抗體具有較好HBsAg結(jié)合活性,其親和常數(shù)達到0.23×10⁸,同時測定了一株鼠源單克隆抗體的親和常數(shù),結(jié)果表明單鏈抗體的親和力為一株鼠源單克隆抗體的十六分之一。競爭ELISA的結(jié)果表明,我們的單鏈抗體可以抑制一株鼠源單克隆抗體與HBsAg的結(jié)合,抑制... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pREp4的限制性圖譜〔2，〕.圖2一3pQE40質(zhì)粒形體圖

.1scFv基因的獲得PCR產(chǎn)物的瓊脂糖電泳結(jié)果如圖4一1所示，在750bp處有較清晰的條帶，而此sFcv基因片段的理論長度為76b3p，初步確認其為ScFv基因的PCR產(chǎn)物。將其切下并膠回收，用所得到的DNA進行下一步實驗。4.1.2重組子的鑒定隨機挑取3個轉(zhuǎn)化子，擴增后小提質(zhì)粒，用BamHI、HindIH雙酶切，瓊脂糖電泳結(jié)果顯示所有克隆均切出一條750bp左右的片段，與插入目的基因片段的理論長度(757bp)相符

直接稀釋法透析法復(fù)性方式的比較圖4一9不同方法復(fù)性后的蛋白回收率及相對比活性Fig.4一9DependeneeoftheproteinreeoveryandrelativesPeeifiebioaetivityonthemethodsofrefolding37


本文編號：2898792