目的:探索并建立一種均相時(shí)間分辨熒光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）檢測(cè)方法,用于快速、靈敏、穩(wěn)定檢測(cè)單克隆抗體的活性。方法:將檢測(cè)試劑、待檢樣品加入96半孔板,室溫振蕩孵育3 h后在酶標(biāo)儀上讀取熒光信號(hào)值,用軟件對(duì)信號(hào)值進(jìn)行四參數(shù)曲線擬和,根據(jù)四參數(shù)方程計(jì)算單抗的相對(duì)活性;同時(shí)對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:本文構(gòu)建的檢測(cè)方法呈典型的反S型劑量效應(yīng)曲線,且反應(yīng)緩沖液中添加0.4 mol·L^-1氟化鉀可提高熒光響應(yīng)值。對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證,專屬性強(qiáng),只與抗PD-1/PD-L1單抗發(fā)生反應(yīng);2名不同分析人員重復(fù)檢測(cè)6次,相對(duì)效價(jià)范圍為85%～117%,總RSD為13%;準(zhǔn)確性良好,不同濃度供試品溶液回收率均在80%～120%范圍內(nèi);理論相對(duì)活性與實(shí)際測(cè)得相對(duì)活性線性良好,相關(guān)系數(shù)在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法驗(yàn)證要求。結(jié)論:通過(guò)對(duì)HTRF檢測(cè)條件的摸索及驗(yàn)證,建立了一種新型測(cè)定單抗活性的方法,且該方法快速簡(jiǎn)便,可用于單抗的前期篩選或后期活性檢測(cè)。 

【文章來(lái)源】：藥物分析雜志. 2019年01期 第45-50頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 儀器
        1.1.2 供試品及主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 Human PD-L1 Protein的標(biāo)記
        1.2.2 HTRF法測(cè)定抗PD-1/PD-L1單抗活性
        1.2.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        1.2.4 方法學(xué)驗(yàn)證
            1.2.4. 1 專屬性
            1.2.4. 2 精密度
            1.2.4. 3 準(zhǔn)確性
            1.2.4. 4 線性
2 結(jié)果
    2.1 HTRF測(cè)定抗PD-1/PD-L1單抗活性的劑量效應(yīng)曲線
    2.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
    2.3 方法的專屬性
    2.4 方法的重復(fù)性及精密度
    2.5 方法的準(zhǔn)確性
    2.6 方法的線性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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