骨質(zhì)疏松(osteoporosis,OP)是一種以骨量下降和骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞為特征的系統(tǒng)代謝性骨病[1]。骨折是OP的嚴(yán)重并發(fā)癥,全球大約每3秒就有1例骨質(zhì)疏松性骨折發(fā)生[2]。而其中髖部骨折作為骨質(zhì)疏松骨折最嚴(yán)重的類(lèi)型,患者由于不得不長(zhǎng)期臥床,并發(fā)包括褥瘡、肺部感染、下肢靜脈血栓以及泌尿系感染等各種嚴(yán)重合并癥的幾率明顯增加。髖部骨折后1年內(nèi)死亡風(fēng)險(xiǎn)增加40%[3],5年內(nèi)死亡率超過(guò)20%[4],嚴(yán)重威脅著患者的生命健康,同時(shí)給患病家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)的全身用藥預(yù)防骨質(zhì)疏松髖部骨折副作用多,依從性差。本實(shí)驗(yàn)采用緩釋技術(shù)局部給藥,通過(guò)增強(qiáng)骨質(zhì)疏松動(dòng)物髖部骨強(qiáng)度,達(dá)到預(yù)防骨質(zhì)疏松性髖部骨折的目的,為未來(lái)臨床應(yīng)用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探索。目的:研究局部應(yīng)用唑來(lái)膦酸(Zoledronic,ZOL)和人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2,rh BMP-2)對(duì)兔骨質(zhì)疏松模型骨強(qiáng)度的作用。方法:30只5月齡雌性新西蘭大白兔,隨機(jī)選取24只采用雙側(cè)卵巢切除術(shù)制造骨質(zhì)疏松模型,另外6只切開(kāi)暴露卵巢后即關(guān)腹,作為假手術(shù)對(duì)照組。造模成功后,24只骨質(zhì)疏松兔隨機(jī)注射rh BMP-2、唑來(lái)膦酸(ZOL)、rh BMP-2+ZOL及生理鹽水作為空白對(duì)照,按注射藥物不同分為BMP組、ZOL組、B+Z組、空白對(duì)照組(NON組)及假手術(shù)組,每組6只動(dòng)物。分別在注射后當(dāng)天、2周、4周、6周、8周、10周、12周,由兔耳緣靜脈取血,分離血清,分別使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)活性;同時(shí)在6周、12周處死取材,處死前進(jìn)行四環(huán)素-鈣黃綠素?zé)晒鈽?biāo)記,應(yīng)用不脫鈣硬組織切片技術(shù),觀察并測(cè)量骨小梁生長(zhǎng)速率;進(jìn)行Micro-CT掃描并三維重建,選取感興趣區(qū),分析骨密度(bone mineral density,BMD)、骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁數(shù)量(Trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular thickness,Tb.Th)和骨小梁間距(trabecular space,Tb.Sp)等指標(biāo),并選取股骨頸基底部為橫截面進(jìn)行生物力學(xué)檢測(cè)。結(jié)果:1)注射后第4周,BMP、B+Z組ALP活性均明顯高于ZOL組和NON組(P0.05);從第6周開(kāi)始,BMP組與B+Z組的ALP活性與假手術(shù)組均無(wú)明顯差異(P0.05);2)在第8、10周,B+Z組TRACP活性明顯低于假手術(shù)組(P0.05);ZOL和B+Z組TRACP活性較早即開(kāi)始下降,并且與BMP組相比下降更快(P0.05)。3)BMP組骨小梁生長(zhǎng)速率在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯高于其他三組(P0.05)。4)注射后第12周,B+Z組的BMD值、BV/TV值、Tb.N值、和Tb.Th值均明顯高于NON組(P0.05),Tb.Sp值則明顯低于NON組(P0.05)。5)注射后第6周,BMP組、ZOL組、B+Z組的最大剪切強(qiáng)度及最大剪切模量之間無(wú)明顯差異(P0.05),但均明顯高于NON組(P0.05);ZOL組的最大剪切應(yīng)變則明顯高于NON組(P0.05);注射后12周,B+Z組最大剪切強(qiáng)度、最大剪應(yīng)變及剪切彈性模量均明顯高于BMP組、ZOL組和NON組(P0.05),并且和假手術(shù)組無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:rh BMP-2和唑來(lái)膦酸聯(lián)合應(yīng)用,能夠更好地抑制破骨細(xì)胞(osteoclast,OC)的骨吸收作用,而rh BMP-2則能夠增強(qiáng)成骨細(xì)胞(osteoblast,OB)的成骨作用,提高骨小梁的生長(zhǎng)速率。同時(shí)兩者聯(lián)合應(yīng)用,可提高骨質(zhì)疏松動(dòng)物局部骨密度,增加骨小梁的數(shù)量、厚度,降低骨小梁的間距,并且增強(qiáng)骨的生物力學(xué)強(qiáng)度。在抑制骨吸收、增強(qiáng)局部骨強(qiáng)度方面,rh BMP-2和ZOL聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于rh BMP-2或ZOL單獨(dú)應(yīng)用。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：R580;R-332
【部分圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文信號(hào)分子之一。在骨組織形成過(guò)程中間充質(zhì)細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞外基質(zhì)合成、分泌依賴(lài)于 BMP2/Smads/Runx2/ Osterix 信號(hào)通路。BMP2 與以異二聚體形式存在的 I 型和Ⅱ型絲氨酸/蘇氨酸激酶受體結(jié)合而轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活已易位至細(xì)胞核的 Smads 復(fù)合物 (Smadl、Smad5、Smad8)，從而誘導(dǎo) Runx2 基因表達(dá)。Runx2（又稱(chēng)為核心結(jié)合因子 a1，core binding factor al，Cbfa1)，Runx2 是成骨細(xì)胞分化、骨發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子 ，作為 BMP--2 的靶基因，是新發(fā)現(xiàn)的調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨方向分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子，在成骨細(xì)胞分化過(guò)程中起著重要作用。Runx2 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖不受影響，而成骨細(xì)胞特異性基因如堿性磷酸酶、骨鈣蛋白(osteocalcin)、OPN 等均上調(diào)，提示 Runx2 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有明顯的促成骨效應(yīng) 。Runx2能調(diào)節(jié)多種成骨細(xì)胞增殖分化特異性標(biāo)志物的表達(dá)。BMP-2 可增強(qiáng) Runx2 依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄，而Runx2 提供 BMP2 激活所必需的因子，兩者能夠發(fā)揮協(xié)同作用。Runx2 是骨形成過(guò)程中最早和最具特異性的標(biāo)志基因，Runx2 的表達(dá)是成骨細(xì)胞開(kāi)始分化的標(biāo)志[50]。

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文的 CaCl2中。唑來(lái)膦酸 4mg 溶于 40ml 生理鹽水中制成 0.1mg/ml 的溶液。將上述制得的 BMP溶液 1ml（或唑來(lái)膦酸溶液 1ml）與 0.5ml 人纖維蛋白原溶液混合，吸入專(zhuān)用注射器①，另一專(zhuān)用注射器②吸取 0.5ml 人凝血酶溶液，將兩個(gè)注射器安裝于雙聯(lián)注射器支架上，兩個(gè)注射器之間用人字形連接管連接，人字形連接管尾部安裝注射針頭，制成藥物緩釋注射系統(tǒng)。（見(jiàn)下圖）

圖 3 藥物緩釋系統(tǒng)的局部注射示意圖清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)在局部注射后的當(dāng)天及注射后第 2 周、第 4 周、 第 6 周、第 8 周、第 10 兔耳緣靜脈取血并分離血清，低溫保存?zhèn)溆�。分別通過(guò)相應(yīng)試劑盒測(cè)定血LP）活性、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）活性（具體方法詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）。環(huán)素-鈣黃綠素?zé)晒怆p標(biāo)素溶液的配制：0.5g 鹽酸四環(huán)素，10ml 生理鹽水，配成 50mg/ml 的溶液避綠素溶液配制：最終配制的濃度要求為 5g/l。NaHCO32g，充分溶解于 1然后加入 0.5g 鈣黃綠素，遮光條件下攪拌混勻，4℃避光保存。在取材前溶液以 50mg/kg 劑量連續(xù)肌注兩天；在取材前至少 2 天，鈣黃綠素 80mg/2]
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 趙宏斌;俞志鵬;王建偉;胡敏;羅德軍;白松;;云南紅河地區(qū)哈尼族髖部骨折流行病學(xué)調(diào)查[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年04期

2 廖二元;;骨質(zhì)疏松防治的現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];藥品評(píng)價(jià);2013年05期

本文編號(hào)：2869869