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人精子膜蛋白cDNA(HSD-1)的表達和功能研究

發(fā)布時間:2020-11-02 04:45
   免疫避孕是指應用免疫學的原理和方法對人類生育力進行調(diào)控,它是近十多年來世界各地科學工作者正在積級進行研究的一類新的避孕方法。 大量的研究報道表明,生殖系統(tǒng)的許多成分,如精子、卵子、生殖激素等均具有抗原性。針對機體精子抗原、卵表面抗原以及生殖激素抗原發(fā)生的免疫反應會干擾生育的生理調(diào)節(jié)過程,這是免疫避孕的理論基礎(chǔ)。 應用免疫學的方法調(diào)控人類生育力可以有幾種不同的途徑。其中最有實用意義的途徑是應用生殖系統(tǒng)的抗原進行主動免疫。即應用疫苗進行免疫。這一途徑的優(yōu)點在于一次或數(shù)次免疫后能誘發(fā)較長時間的免疫力,它的抗生育效應是通過誘發(fā)的抗體或活化的淋巴細胞或兩者的共同作用而實現(xiàn)的。 應用疫苗進行避孕的一個最關(guān)鍵的問題是能發(fā)現(xiàn)一個精子特異的,且具有強免疫原性的抗原。本課題組從70年代末期開始涉獵這一研究領(lǐng)域。到目前已經(jīng)純化了數(shù)種具有強免疫原性的精子蛋白;克隆了一些與生育過程相關(guān)的蛋白的cDNA。其中一個cDNA HSD-1,是應用含有抗精子抗體的不育病人的血清從人睪丸cDNA文庫中篩選得到的。提示這個基因編碼的蛋白質(zhì)可能在生殖過程中起作用。本文在此基礎(chǔ)上對HSD-1cDNA及其可能含有抗原決定簇的片
【學位單位】:中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】:博士
【學位年份】:1997
【中圖分類】:R321
【部分圖文】:

重組質(zhì)粒,測序


或HindHI酶切,分別可以切出約550bp的片段。因此可以確定pQE30艦sD一l(55obp)為構(gòu)建正確的重組質(zhì)粒。此外,我們又對此重組質(zhì)粒進行了測序驗證。圖8為pQE3o艦SD一l(550bP)的測序結(jié)果。Lanel,LambdaDNA/HindlllMarkerLaneZ,pQE3oH/SD一l(550bp)質(zhì)粒Lane3,PQE30H/SD一1(55ObP)B/amHILane4,PQE30舊SD一I(550bP)H/indlllLanes,PBR322/BstNIMarker2345圖7,pQE3o沮SD一l(55obp)重組質(zhì)粒的酶切鑒定一一一一一.一8l

電泳圖譜,誘導表達,畢業(yè)論文,高效表達


中國協(xié)和醫(yī)科大學博士研究生畢業(yè)論文結(jié)果將經(jīng)酶切鑒定和測序后確定為正確的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入EochM巧菌.進行PITG誘導表達。12%SDS一PAGE檢測蛋白質(zhì)表達情況,見圖3Lna4ec由電泳圖譜可見pQE30艦SD一1(55b0P)在PITG誘導3小時后,得到高效表達,表達蛋白占細菌SDS一裂解液總蛋白的25.5%,圖o9

抗體檢測,抗體,畢業(yè)論文,ELISA法


巾國協(xié)和醫(yī)科大學博士研究生畢業(yè)論文4抗HSD一1多克隆抗體的制備抗Hsn一l多克隆抗體由美國Inc(Denver,pA)制備。1.smg純化的表達備抗體,ELISA法測得抗體的滴度為1x為了進一步鑒定抗體的特異性,認衛(wèi)STERNBLOT,抗體的稀釋度為1:不同大小的表達蛋白5k5d、2盈kd和14kd
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 繆時英,李月華,周荔申,陳雅娣,白云,王琳芳,嚴緣昌;一種人精子膜蛋白基因的克隆與鑒定[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;1990年06期

2 沙國柱;精子生育相關(guān)抗原研究進展[J];男性學雜志;1996年01期

3 梁植權(quán),王琳芳,繆時英,趙敏順,曹淑蘭,吳炳瑛,柯林林;精子膜蛋白的研究Ⅰ.具有同種抗原性的兔精子膜蛋白A的分離[J];中國醫(yī)學科學院學報;1980年03期

4 王琳芳,繆時英,曹淑蘭,吳炳瑛,柯林林,梁植權(quán);精子膜蛋白的研究——Ⅲ、兔精子膜蛋白“A”的定位及其酯酶活性的觀察[J];中國醫(yī)學科學院學報;1982年02期



本文編號:2866588

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