目的通過經(jīng)尾靜脈或腹腔兩種方式給NOD/SCID小鼠注射正常人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)的方式,來探究對于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型兩種移植方式建模效果的比較,隨后對該模型進(jìn)行HIV病毒感染的鑒定。方法將9只雌性NOD/SCID小鼠給予亞致死劑量全身照射后,分為3組,實(shí)驗(yàn)Ⅰ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,腹腔注射0.5 mLPBMC細(xì)胞懸液;實(shí)驗(yàn)Ⅱ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,尾靜脈注射0.2mLPBMC細(xì)胞懸液;實(shí)驗(yàn)Ⅲ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,注射0.2mLRPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液,作為Ⅰ組及Ⅱ組的實(shí)驗(yàn)對照。通過觀察移植細(xì)胞后小鼠的存活時(shí)間與生活狀態(tài),并施以流式細(xì)胞技術(shù)鑒定小鼠眼眶外周血中CD45~+、CD4~+、CD8~+等人源化細(xì)胞的比例。另取4只NOD/SCID小鼠進(jìn)行腹腔移植3天后,腹腔注射HIV感染的PBMCs細(xì)胞并以未移植的NOD/SCID小鼠作為對照,在感染后第5wk采集小鼠眼眶血,流式細(xì)胞技術(shù)及免疫熒光定量PCR方法分別檢測其CD45~+、CD4~+、CD8~+等人源化細(xì)胞的比例及病毒滴度。結(jié)果兩種方式注射正常人PBMC細(xì)胞至小鼠內(nèi)2～10周后,實(shí)驗(yàn)組小鼠體內(nèi)均檢測到人源化免疫細(xì)胞的浸潤,各細(xì)胞比例隨小鼠移植時(shí)間而增加;但相比尾靜脈注射,腹腔注射鼠內(nèi)人源性免疫細(xì)胞比例明顯較高;此外二種移植方式小鼠存活時(shí)間均達(dá)10wk,即成功建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型。隨后對該人鼠嵌合模型進(jìn)行腹腔注射HIV感染的PBMC,第5周免疫熒光定量PCR能檢測到病毒滴度,發(fā)現(xiàn)病毒滴度上升,同時(shí)結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)分析隨著病毒滴度上升,CD45~+分子比例下降且CD4~+/CD8~+1。結(jié)論應(yīng)用尾靜脈或腹腔注射正常人外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)的方法,均可建立人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型;但我們發(fā)現(xiàn)相比尾靜脈注射方式,腹腔注射對于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型有著明顯的優(yōu)勢。同時(shí)通過腹腔注射HIV感染的PBMC至該模型,HIV病毒可以成功地被感染。這為艾滋病體外潛伏機(jī)制的研究和抗病毒藥物篩選提供了良好的動物模型。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及細(xì)胞
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 人外周血單核細(xì)胞 （PBMCs） 的分離
        1.2.2 移植細(xì)胞的準(zhǔn)備以及注射
        1.2.3 NOD/SCID小鼠的人源化小鼠模型的建立
        1.2.4 HuPBMCs-NOD/SCID小鼠契合模型的鑒定
        1.2.5 感染HIV-1
        1.2.6 HIV-1病毒載量檢測
        1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 NOD/SCID小鼠移植后存活情況
    2.2 人外周血單個核細(xì)胞在NOD/SCID小鼠體內(nèi)移植后細(xì)胞分化
    2.3 人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型的建立
    2.4 HIV感染人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型的鑒定
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2865085