發(fā)布時(shí)間：2020-10-26 15:46

　　 目的評(píng)價(jià)氫化可的松誘發(fā)小鼠藥源性脾腎虛證模型,并探索其物質(zhì)基礎(chǔ)。方法 80只ICR小鼠按隨機(jī)分為對(duì)照組、極低、低、中、高劑量組,每組16只,分別采用滅菌水、0.33、0.66、3.3、12.5 mg/(kg·d)氫化可的松灌胃。每日動(dòng)態(tài)觀測小鼠體重,并分別在給藥第7天和第14天,檢測小鼠抓力、曠場活動(dòng)度、軀體不同部位紅外溫度等表征信息。分別于給藥第8天和第15天各處死小鼠8只,取脾臟、胸腺、心臟和腎臟稱重并計(jì)算臟器指數(shù);ELISA檢測血清皮質(zhì)酮(CORT)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測腎上腺StAR、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2 mRNA表達(dá);Western Blot檢測腎上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組同期比較,低、中劑量組4～14天體重下降(P0.05),極低劑量組7天尾部最低溫度、StAR、Cyp21a1 mRNA表達(dá),14天頭部最高溫度、軀干平均溫度、尾部最低溫度以及ACTH含量、LDLR、StAR蛋白表達(dá)下降(P0.05,P0.01),14天抓力上升(P0.05);低、中、高劑量組7、14天頭部最高溫度、軀干平均溫度、尾部最低溫度、胸腺重量和指數(shù)下降(P0.05,P0.01);低劑量組7、14天StAR mRNA、LDLR、StAR表達(dá)下降(P0.05,P0.01),14天CORT含量、ACTH、Cyp11a1、Cyp11b1 mRNA表達(dá)下降(P0.05,P0.01);中、高劑量組7、14天脾臟重量和指數(shù)、CORT含量、ACTH、StAR、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA、LDLR、SRBI、StAR表達(dá)下降(P0.05,P0.01),14天Cyp11a1、Cyp11b2 mRNA下降(P0.05,P0.01);高劑量組14天體重、曠場活動(dòng)度下降(P0.05)。結(jié)論采用0.66及3.3 mg/(kg·d)氫化可的松持續(xù)給藥14天可建立穩(wěn)定的藥源性脾腎虛證小鼠模型,可能與其降低腎上腺皮質(zhì)激素合成酶表達(dá)和垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能有關(guān)。
【部分圖文】：

７．０專業(yè)軟件進(jìn)行作圖及統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用ｘ±ｓ表示，多組間比較采用Ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ方差分析，多組間兩兩比較，采用ＳＮＫ（Ｓ）檢驗(yàn)，Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果１各組小鼠體重比較（圖１）對(duì)照組小鼠體重穩(wěn)定在３１～３３ｇ。與對(duì)照組同期比較，低、中劑量組４～１４天體重下降（Ｐ＜０．０５）；高劑量組１４天體重下降（Ｐ＜０．０５）。注：與對(duì)照組比較，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１；下圖同圖１各組小鼠體重比較表１小鼠腎上腺皮質(zhì)功能相關(guān)基因引物序列基因名稱基因庫號(hào)引物序列產(chǎn)物長度（ｂｐ）β－ａｃｔｉｎＮＭ＿００７３９３上游：５′－ＴＧＴＴＡＣＣＡＡＣＴＧＧＧＡＣＧＡＣＡ－３′下游：５′－ＧＧＧＧＴＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＡＡＡ－３′１６５Ｃｙｐ１１ａ１ＮＭ＿０１９７７９上游：５′－ＡＣＴＴＣＣＧＧＴＡＣＴＴＧＧＧＣＴＴＴ－３′下游：５′－ＧＣＴＴＧＡＧＡＧＧＣＴＧＧＡＡＧＴＴＧ－３′２０１Ｃｙｐ１１ｂ１ＮＭ＿００１０３３２２９上游：５′－ＧＴＡＴＣＧＡＧＡＧＣＴＧＧＣＡＧＡＧＧ－３′下游：５′－ＧＧＧＴＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＣＡＧＴＧ－３′１４０Ｃｙｐ１１ｂ２ＮＭ＿００９９９１上游：５′－ＣＴＧＡＡＣＧＣＴＡＴＡＴＧＣＣＴＣＡＧＣ－３′下游：５′－ＡＧＴＧＴＣＴＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＴ－３′１６０Ｃｙｐ２１ａ１ＮＭ＿００９９９５上游：５′－ＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡ－３′下游：５′－ＡＣＡ

４天８０．４６±０．１２＊０．９２±０．１９０．２１±０．０６＊中劑量７天８０．２１±０．０５＊＊０．１２±０．０４＊＊０．１３±０．０５＊＊１４天８０．０８±０．０２＊＊０．１２±０．０３＊＊０．０９±０．０１＊＊高劑量７天８０．１１±０．０４＊＊０．０８±０．０１＊＊０．１３±０．０６＊＊１４天８０．０９±０．０１＊＊０．１０±０．０２＊＊０．０７±０．０１＊＊注：Ａ為給藥７天；Ｂ為給藥１４天圖２各組腎上腺類固醇激素合成相關(guān)蛋白表達(dá)討論氫化可的松為常用的糖皮質(zhì)激素藥物，因其分子結(jié)構(gòu)最接近生理狀態(tài)下的可的松且不需要在肝臟轉(zhuǎn)化即可發(fā)揮較強(qiáng)的藥理作用，因此，在臨床被廣泛運(yùn)用。既往以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為對(duì)象采用氫化可的松模擬臨床給藥，從中醫(yī)學(xué)“腎”藏象角度開展了多項(xiàng)疾病、證候模型及其物質(zhì)基礎(chǔ)研究［８－１０］。但是依然存在一些問題：第一，關(guān)于氫化可的松造模的用藥劑量，不同文獻(xiàn)差異較大，檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)小鼠造模期間體內(nèi)接受氫化可的松總量為３５～６００ｍｇ／ｋｇ（以２００～３５０ｍｇ／ｋｇ居多）。第二，關(guān)于氫化可的松造模小鼠的時(shí)間和給藥方式也存在較大差異，最短者３天，最長者達(dá)２９天；給藥方式以注射劑為主，包括肌肉注射、皮下注射和腹腔注射，也包括灌胃或飲水給藥等方式。第三，對(duì)于氫化可的松造模小鼠后證候的評(píng)判指標(biāo)不統(tǒng)一，主要涉及小鼠外觀表現(xiàn)、體重、體溫、免疫學(xué)指標(biāo)、血液激素等。最后，對(duì)氫化可的松抑制腎上腺皮質(zhì)軸的分
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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