【摘要】： 白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）主要由活化的T淋巴細(xì)胞 合成并分泌，在免疫系統(tǒng)中它的主要作用是通過結(jié)合于T淋巴細(xì) 胞上的特異性受體刺激T淋巴細(xì)胞克隆性增殖等，對(duì)機(jī)體起著重 要的免疫調(diào)節(jié)功能。 近年來，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中，發(fā)現(xiàn)有IL-2 或IL-2樣免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)的表達(dá)。例如：有人應(yīng)用放射免疫法， 測(cè)出大鼠的正中隆起、弓狀核、海馬及大腦皮層等腦區(qū)有IL-2樣 免疫活性物質(zhì)。與此同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)內(nèi)分泌系 統(tǒng)能夠表達(dá)IL-2受體（IL-2 receptor，IL-2R）α、β、γ三條鏈，且不 同腦區(qū)IL-2R的分布及密度不同。推測(cè)IL-2因而發(fā)揮不同的生理 功能，如IL-2可能具有營養(yǎng)神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的功能，能夠影響 神經(jīng)遞質(zhì)的分泌等。 雌激素主要是由性腺合成及分泌的一種類固醇激素。雌激素 與細(xì)胞核內(nèi)特異性雌激素受體結(jié)合，發(fā)揮核轉(zhuǎn)錄因子樣作用，調(diào) 控某些基因的表達(dá)水平。業(yè)已發(fā)現(xiàn)雌激素經(jīng)典的核受體有兩種亞 型，即α亞型和β亞型，此二者在各種組織分布及密度迥異，介導(dǎo) 第四軍醫(yī)大學(xué)碩土學(xué)位論文 速效應(yīng)，推測(cè)在細(xì)胞膜上可能存在與雌激素結(jié)合的結(jié)構(gòu)或受體。 雌激素對(duì)垂體有重要的反饋調(diào)節(jié)作用，不僅影響垂體中促性腺激 素細(xì)胞的增殖和激素分泌，而且對(duì)其它腺垂體細(xì)胞的增殖和激素 的合成以及分泌有重要的作用。 有研究報(bào)道，一些鼠源垂體瘤細(xì)胞系及人垂體瘤細(xì)胞能夠表 達(dá)IL－2及其受體，某些因素如M和PMA能夠調(diào)控n－2及其 受體的表達(dá)。有證據(jù)顯示，正常垂體前葉細(xì)胞中存在IL2并表達(dá) 其受體。正常大鼠垂體前葉不同細(xì)胞中IL．ZR表達(dá)的密度依次為 PRL、ACTH、GH細(xì)胞。推測(cè)IL2在垂體前葉中可能作為旁分 泌或自分泌方式調(diào)節(jié)垂體前葉細(xì)胞的增殖、影響垂體前葉激素及 某些活性物質(zhì)的合成及分泌。 此前，我們實(shí)驗(yàn)室以免疫組織化學(xué)等方法，發(fā)現(xiàn)在大鼠正常 垂體前葉有IL－2及其受體的兔疫反應(yīng)陽性物質(zhì)，垂體前葉中IL2 及其受體的表達(dá)有性別差異，雌性大鼠垂體前葉中兀－2及其受體 隨性周期而表現(xiàn)出一定的規(guī)律性。然而，在基因水平，大鼠正常 垂體前葉是否有IL－2存在還未見報(bào)道。 我們以前的研究還發(fā)現(xiàn)，在大鼠垂體前葉某些細(xì)胞中有n－2 和雌激素受體（ER）兔疫陽性物質(zhì)共存；IL－2可促進(jìn)大鼠垂體前 葉細(xì)胞＊Ra基因的轉(zhuǎn)錄活性，而抑制＊邵基因的轉(zhuǎn)錄活性；在體 條件下，雙側(cè)卵巢切除術(shù)后，補(bǔ)充雌二醇能夠抑制IL．2樣免疫陽 性物質(zhì)的表達(dá)。在功能研究方面，ILZ對(duì)垂體瘤細(xì)胞系和人垂體 腺瘤細(xì)胞的增殖作用受到雌激素的影響，二卜 對(duì)正常大鼠垂體前 葉細(xì)胞的增殖調(diào)控作用也受到機(jī)體雌激素水平變化的影響。這些 研究都提示IL－2和雌激素在調(diào)控大鼠垂體前葉細(xì)胞功能中有交互 作用。 2 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 作用。 本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簭幕蛩阶C實(shí)在正常大鼠垂體前葉有IL．2 M的表達(dá)，及雌激素對(duì) IL－2 W轉(zhuǎn)錄的影響。進(jìn)一步確 證IL－2和雌激素在正常大鼠垂體前葉的相互關(guān)系。 在以往的研究基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用如下方法： 1．分離正常大鼠的垂體前葉組織，并提取總RNA。 2．正常大鼠垂體前葉進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)5－7天，再從培養(yǎng)細(xì) 胞中提取總RNA。 3．將上述提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄成CDNA，再進(jìn)行PCR 采 用凝膠電泳的方法回收并純化所得的PCR產(chǎn)物，通過DNA 序列分析儀檢測(cè)回收的片段，將檢測(cè)結(jié)果與基因文庫比較 來確定是否為IL－2。 4．挑選20只成年雌性大鼠門00＜ 人 隨機(jī)分成4組，每 組5只。每組按照以下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 1）正常＋苯甲酸雌H醇組田。） 2）雙側(cè)卵巢摘除組＊variectomy3 OVp 3）卵巢摘除＋苯甲酸雌二醇組＊VX＋E。） 4）百巢摘除＋油劑組（OVX＋V） 除第一組不進(jìn)行手術(shù)，其余三組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)， 術(shù)后第一組和第三組每日皮下注射苯甲酸雌二醇，第四組 每日皮下注射芝麻油，第二組不進(jìn)行任何注射。 5．培養(yǎng)兩周后，提取垂體前葉的總RNA，初步測(cè)定每個(gè)樣 本的RNA含量，隨后取等量的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，采用內(nèi) 對(duì)照的方法進(jìn)行半定量RT－PCR，將結(jié)果用分析軟件進(jìn)行分 析。 三 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果顯示： 1．從正常大鼠垂體前葉組織提取的RNA中，能夠用PCR的 方法，得到與n－ZMA某一段相同的片段。 2．從正常大鼠垂體前葉培養(yǎng)的細(xì)胞中，同樣也能夠用PCR 的方法，得到與 IL－2 InRNA某一段相同的片段。 3．正常雌性大鼠行卵巢切除術(shù)后，皮下注射雌二醇比單純 OVX能夠顯著性地抑制 IL－2 ITnNA的表達(dá)。 本研究表明，大鼠正常垂體前葉有IL．2 WA的表達(dá)，在體 條件下，雌激素能夠影響大鼠正常垂
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R335
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮寫詞表
文獻(xiàn)回顧
研究目的
材料和方法
    （一） 實(shí)驗(yàn)材料
    （二） 實(shí)驗(yàn)方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬晶;于永利;;非受體型酪氨酸激酶蛋白與免疫細(xì)胞的信號(hào)傳遞[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1998年03期

本文編號(hào)：2856681