目的建立小鼠銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)肺部感染模型,并對該模型進(jìn)行初步評價。方法采用一種快速無創(chuàng)的小鼠氣管插管滴注法,將小鼠在透射燈照射下經(jīng)口咽氣管插管,滴注1×10~8 CFU/mL的銅綠假單胞菌懸液50μL,待接種感染7 d后處死,進(jìn)行肺部菌落計(jì)數(shù)和病理學(xué)評價。結(jié)果經(jīng)氣管接種感染后,與對照組小鼠比較,感染組小鼠生理狀態(tài)不佳,肺組織勻漿檢出PA,血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)目顯著增多(P0.05),且出現(xiàn)肺部病理學(xué)改變,顯示有炎癥反應(yīng);對照組小鼠肺組織勻漿則未見PA生長,且血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)目正常,未出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。結(jié)論采用小鼠氣管插管滴注法,通過呼吸道感染途徑可成功建立小鼠肺部PA感染模型,該模型具有穩(wěn)定性好,易定量的優(yōu)點(diǎn)。
【部分圖文】：

行組織病理學(xué)檢查，并通過光學(xué)顯微鏡分析炎癥的范圍及程度。1．2．7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。所有計(jì)量數(shù)據(jù)均以x珋±s表示，兩樣本間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0．05。2結(jié)果2．1生理狀態(tài)考察首先考察了小鼠的活動狀態(tài)、進(jìn)食、飲水、毛發(fā)等生理情況，并檢測了小鼠的體質(zhì)量變化情況，結(jié)果如圖1所示。對照組小鼠在適應(yīng)環(huán)境后表現(xiàn)較好的活動能力，且能正常的進(jìn)行進(jìn)食和飲水，毛發(fā)也較柔順光亮，小鼠體質(zhì)量出現(xiàn)短暫下降后迅速恢復(fù)到正常體質(zhì)量。與對照組小鼠相比，感染組小鼠在感染細(xì)菌24h后活動能力明顯減弱，進(jìn)食和飲水情況有所減少，毛發(fā)紊亂，并出現(xiàn)寒戰(zhàn)表現(xiàn)，而且體質(zhì)量明顯下降。小鼠在感染細(xì)菌48h后體質(zhì)量繼續(xù)下降，感染72h后體質(zhì)量有所恢復(fù)，但仍明顯低于對照組。其原因可能是小鼠肺部感染細(xì)菌后引起肺部炎癥及其他病理反應(yīng)，導(dǎo)致各種不適，故引起小鼠食欲下降，體質(zhì)量減輕。302520151234567對照組感染組時間/d體質(zhì)量/g圖1對照組和感染組小鼠體質(zhì)量變化情況2．2血常規(guī)分析小鼠感染細(xì)菌7d后，將小鼠進(jìn)行處死，取小鼠眼球血進(jìn)行血常規(guī)分析，結(jié)果如圖2所示。血常規(guī)分析結(jié)果表明，感染組小鼠血液中白細(xì)胞數(shù)目和中性粒細(xì)胞數(shù)目顯著高于對照組，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0．05)，并超過了正常理論值的范圍。此結(jié)果表明小鼠感染細(xì)菌后，有炎癥發(fā)生，初步證實(shí)已成功構(gòu)建感染模型。2．3肺組織勻漿菌落計(jì)數(shù)對感染組和對照組各10只小鼠肺部組織進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染組小鼠肺組織培養(yǎng)出乳白色、大小不等、表面光滑濕潤、邊緣不規(guī)則的?

單胞菌菌落，而對照組則未培養(yǎng)出銅綠假單胞菌。同時取肺組織勻漿后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以每克肺組織所含菌落數(shù)來表示肺組織勻漿菌落計(jì)數(shù)。菌落計(jì)數(shù)結(jié)果表明，感染組細(xì)菌計(jì)數(shù)為(6．15±0．64)×106CFU/g，均超過106CFU/g，符合急性肺部感染指征［10］，而對照組在對應(yīng)濃度下則未檢出細(xì)菌菌落。該結(jié)果也說明通過氣管插管滴注法成功建立了小鼠細(xì)菌肺部感染模型。1614121086420對照組感染組白細(xì)胞中性粒細(xì)胞細(xì)胞計(jì)數(shù)(109/L)aaa:P＜0．05，與對照組比較圖2對照組和感染組小鼠血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(x珋±s)2．4肺組織病理切片小鼠肺部組織切片的病理觀察如圖3所示。HE染色病理切片顯示，感染組小鼠肺組織可見大量炎性細(xì)胞浸潤，肺泡壁結(jié)構(gòu)破壞，上皮細(xì)胞脫落，肺泡壁及肺泡腔可見彌散的紅細(xì)胞，而正常對照組則未見異常。另外，通過觀察新取的肺部組織外觀，發(fā)現(xiàn)感染組小鼠的肺組織有不同程度的充血、水腫及出血表現(xiàn)，且肺組織顏色明顯加深，而對照組肺組織則無其他異常變化。該結(jié)果證明采用氣管插管滴注法成功建立了肺部細(xì)菌感染模型。20滋m20滋mAB→→→A:對照組;B:感染組;箭頭示肺泡壁結(jié)構(gòu)破壞，炎性細(xì)胞浸潤，可見彌散性紅細(xì)胞圖3對照組和感染組小鼠肺部組織HE染色觀察(×200)3討論銅綠假單胞菌是全球公認(rèn)的醫(yī)院獲得性感染最常見、最重要的致病菌之一［11］，該菌具有易定植、感染率高，易耐藥的特點(diǎn)。近年來由于抗生素的應(yīng)用愈發(fā)廣泛，該菌耐藥性逐漸上升，給臨床治療帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)［12］。研究表明，引起醫(yī)院獲得性肺炎和呼吸道感染029
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2854634