缺氧性肺動脈高壓是高原肺水腫、高原心臟病和慢性肺源性心臟病等疾病發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。大量研究顯示,缺氧引起的肺血管收縮,尤其是肺小動脈平滑肌收縮和結(jié)構(gòu)改建是缺氧性肺動脈高壓形成和維持的基礎(chǔ)。在體實驗證明,缺氧可引起多種細(xì)胞因子含量的改變,如血小板源性生長因子、內(nèi)皮素等,同時也能引起鉀離子通道活性的改變及缺氧誘導(dǎo)因子等基因的的轉(zhuǎn)錄激活。缺氧雖不能增加肺組織中血管緊張素-II的含量,但卻能增強血管緊張素-II的受體(AT1)的表達(dá)。體外培養(yǎng)實驗顯示,缺氧培養(yǎng)可刺激肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖,表明肺動脈平滑肌細(xì)胞可直接感受缺氧的刺激信號。在上述多種機制的共同作用下,肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖加強,無肌性微血管發(fā)生肌化,細(xì)胞外基質(zhì)大量生成,進而肺血管發(fā)生結(jié)構(gòu)重建,管壁增厚,管腔狹窄,阻力增大,最終導(dǎo)致肺動脈高壓的發(fā)展和維持。 胍基丁胺(AGM)是L-精氨酸在精氨酸脫羧酶(ADC)作用下的產(chǎn)物,幾乎在哺乳動物體內(nèi)所有器官和組織內(nèi)都有分布,其含量呈器官特異性。已有研究顯示,胍基丁胺在心血管系統(tǒng)有著廣泛的生理作用。胍基丁胺能降低心率、平均動脈壓、左室壓、外周血管阻力和心指數(shù)等,提示胍基丁胺是一種新的血管活性物質(zhì)。本實驗室的研究顯示:肺組織中有胍基丁胺,主要分布在血管平滑肌和支氣管平滑肌中。胍基丁胺可引起離體肺動脈劑量依賴性舒張。上述結(jié)果提示胍基丁胺在肺循環(huán)的調(diào)節(jié)中具有重要作用,但迄今為止,有關(guān)胍基丁胺對肺血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控作用尚未見報道。 本實驗通過組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞,在肺動脈平滑肌細(xì)胞常氧血清培養(yǎng)和缺氧培養(yǎng)過程中應(yīng)用胍基丁胺處理,觀察肺動脈平滑肌細(xì)胞3H-胸腺嘧啶脫氧核苷(3H-TdR)的摻入、細(xì)胞周期中各期細(xì)胞百分比與增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的改變,探討胍基丁胺對肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響。同時觀察胍基丁胺對血管緊張素-II和血小板源性生長因子所刺激的肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響,以及胍基丁胺對兩種因素刺激作用下細(xì)胞增殖中細(xì)胞內(nèi)絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)含量的影響,探討胍基丁胺調(diào)節(jié)肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的可能機制,為深入揭示肺動脈高壓的形成 WP=9 和發(fā)展提供理論依據(jù),同時也為胍基丁胺在防治缺氧性肺動脈高壓中的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 本實驗共分三部分。第一部分為大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)、免疫組化鑒定和生長曲線測定。原代培養(yǎng)雄性Wistar大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞,傳代純化,用抗(-平滑肌肌動蛋白單克隆抗體作免疫組化鑒定,細(xì)胞純度在98%以上。在培養(yǎng)過程中應(yīng)用大劑量胍基丁胺(1mmol/L)處理,測定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的含量,同時觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變。觀察胍基丁胺(100(mol/L)對肺動脈平滑肌細(xì)胞生長曲線的影響。第二部分為胍基丁胺對大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增于的影響。取培養(yǎng)至5-10代的肺動脈平滑肌細(xì)胞,按實驗設(shè)計進行分組。實驗分為常氧培養(yǎng)部分和缺氧培養(yǎng)部分,用缺氧孵箱進行缺氧培養(yǎng),氧濃度定為2.5%。實驗測定指標(biāo)有3H-TdR摻入量、細(xì)胞周期和增殖細(xì)胞核抗原含量。3H-TdR摻入量測定時,常氧部分實驗分組為無血清組(SF)、10%新生小牛血清組(S)、血清復(fù)合胍基丁胺組(SA)。其中血清復(fù)合胍基丁胺組再分為:單純血清培養(yǎng)組、50(M AGM組、100(M AGM組、200(M AGM組和500(M AGM等組。缺氧部分分組為單純?nèi)毖踅M、50(M AGM組、100(M AGM組、200(M AGM組和500(M AGM組。用液閃計數(shù)法測量肺動脈平滑肌細(xì)胞3H-TdR的摻入量。細(xì)胞周期測定時,常氧部分實驗分組為單純血清培養(yǎng)組和血清復(fù)合胍基丁胺(100(M AGM)組,缺氧部分實驗分組為單純?nèi)毖踅M和缺氧復(fù)合胍基丁胺(100(M AGM)組,用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期中各期細(xì)胞所占比例。增殖細(xì)胞核抗原含量測定時,常氧部分實驗分組為單純血清培養(yǎng)組和血清復(fù)合胍基丁胺(100(M AGM)組,缺氧部分實驗分組為單純?nèi)毖踅M和缺氧復(fù)合胍基丁胺(100(M AGM)組,用免疫組化法作增殖細(xì)胞核抗原染色,圖像分析法測定其相對含量。第三部分為胍基丁胺調(diào)控大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖機制的初步研究。實驗測定指標(biāo)有3H-TdR摻入量和絲裂原活化蛋白激酶含量。實驗分常氧部分和缺氧部分。常氧部分分組為Ang-II組、Ang-II復(fù)合胍基丁胺組、PDGF組和PDGF復(fù)合胍基丁胺組。用液閃計數(shù)法測量肺動脈平滑肌細(xì)胞3H-TdR的摻入量,用免疫組化作MAPK染色,用圖像分析法測定其相對含量。缺氧部分分組為Ang-II組、Ang-II復(fù)合胍基丁胺組、PDGF組和PDGF復(fù)合胍基丁胺組。用液閃計數(shù)法測量肺動脈平滑肌細(xì)胞3H-TdR的摻入量。 主要結(jié)果 1.大劑量胍基丁胺對肺動脈平滑肌細(xì)胞形態(tài)無顯著影響,細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶濃度與對照組相比無顯著差異。 2.胍基丁胺影響肺動脈平滑肌細(xì)胞的生長曲線,細(xì)胞增殖顯著減慢。 WP=10 3.胍基丁胺對常氧無血清培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖無顯著影響;胍基丁胺對10%NCS刺激的肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖有顯著抑制作用,且呈劑量依賴性。 4.胍基丁胺對缺氧無血清培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖有顯著抑制作用,且呈劑量依賴性。 5.胍基丁胺使血清和缺氧誘導(dǎo)增殖的肺動脈平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期各期比例發(fā)生改變,G0/G1期細(xì)胞比例增加,而G2/M期細(xì)胞比例減少。 6.胍基丁胺能使血清和缺氧誘導(dǎo)增殖的肺動脈平滑肌
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 李清,何瑞榮;胍丁胺對Dahl鹽敏感型高血壓大鼠和Dahl鹽抵抗型大鼠血流動力學(xué)的影響(英文)[J];生理學(xué)報;2001年05期

2 趙斌,夏國光,杜軍保;L-精氨酸對低氧性肺動脈高壓大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡的影響[J];實用心腦肺血管病雜志;2000年02期

3 馮曉東，蔡英年，李世強，周曉梅;內(nèi)皮素－1對缺氧肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1995年03期

4 劉健,羅德成,王培勇,許蜀閩,孫秉庸,陳兆珍;缺氧對體外培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細(xì)胞形態(tài)及增殖的影響[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1997年02期

5 湯紅亞,高鈺琪,劉福玉,牟信兵,鄭碧海,何艷梅;L-精氨酸 前列腺素E_1降低快速進入高原豬肺動脈高壓效果的比較觀察[J];中國急救醫(yī)學(xué);2003年07期

6 林紅,蔡英年,宋為,周曉梅,龔伊紅,董繼紅;L-精氨酸和硝普鈉對缺氧大鼠肺動脈壓及血管結(jié)構(gòu)變化的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;1997年03期

7 曹偉標(biāo)，曾正陪，朱元玨，羅慰慈，王再非;L－精氨酸對犬急性缺氧性肺動脈高壓及內(nèi)皮素水平的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;1996年03期

本文編號：2817615