從江浙蝮蛇的毒腺中提取總RNA，經(jīng)RT-PCR擴增出一個長為 987bp的金屬蛋白酶基因，該基因編碼317個氨基酸的開放性閱讀框（非全 長），包括酶原前肽結(jié)構(gòu)域（Proprotein domain）的一部分，完整的金屬蛋白酶 結(jié)構(gòu)域（Metalloproteinase domain）和去整合蛋白結(jié)構(gòu)域（Disintegrin domain）。在酶原前肽結(jié)構(gòu)域含高度保守的PKMCGVT序列（又稱半胱氨 酸開關(guān)），在活性中心金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域中含高度保守的鋅離子結(jié)合序列 HEXXHXXGXXH，去整合蛋白結(jié)構(gòu)域中的Arg-Gly-Asp（RGD）序列被認為 能與血小板膜上的整合蛋白結(jié)合，具有抑制血小板聚集的功能。該序列與 其它蛇毒的金屬蛋白酶/去整合蛋白具有較高的同源性，屬于N—Ⅱ類金 屬蛋白酶。根據(jù)推導出的氨基酸序列，我們還探討了該酶原前體可能的加 工機制。將該基因各功能結(jié)構(gòu)域分別克隆至表達載體pET-22b，轉(zhuǎn)化入大腸 桿菌BL21中，誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE檢測，只含金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域以 及既含金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域又含去整合蛋白結(jié)構(gòu)域的兩重組質(zhì)粒在相應大小 處均有表達條帶，表達產(chǎn)物約占細菌蛋白總量的20％，并以包涵體的形式 存在。純化包涵體后，將產(chǎn)物變性成可溶形式，然后用Ni-NTA對表達產(chǎn)物 純化，SDS-PAGE檢測為一條帶，包涵體的復性是一項非常困難的工作， 尤其是對含有多對二硫鍵的蛋白質(zhì)，因此復性后凍干，測它的某些活性時， 結(jié)果的重復性不太理想。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2001
【中圖分類】：Q55

【引證文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 張箴波;蛇毒纖溶酶的純化、性質(zhì)鑒定、與水蛭素對血栓的協(xié)同作用研究[D];廣西醫(yī)科大學;2006年

2 張志曉;利用生物信息學方法制備尖吻蝮蛇蛇毒DNA疫苗[D];云南大學;2010年

本文編號：2813861