腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的一類疾病，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，基因治療有望成為攻克腫瘤的突破口。在腫瘤患者重建有效的免疫應(yīng)答及抑制腫瘤血管生成，是腫瘤治療的重要策略。研究表明，趨化因子不僅具有引導(dǎo)淋巴細(xì)胞定向遷移的功能，并能作為免疫調(diào)節(jié)因子，參與淋巴細(xì)胞的活化過(guò)程。趨化因子還能調(diào)節(jié)血管生成。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，趨化因子用于腫瘤治療已經(jīng)取得了顯著成效。4T1是BALB／c鼠源性乳腺癌細(xì)胞系，RT-PCR結(jié)果顯示，具有募集效應(yīng)細(xì)胞及抑制血管生成作用的趨化因子IP10及ITAC在4T1細(xì)胞的表達(dá)水平較低。我們推測(cè)增強(qiáng)IP10或ITAC在4T1細(xì)胞的表達(dá)可能會(huì)影響4T1腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究以小鼠4T1乳腺癌為模型，觀察改變IP10或ITAC的表達(dá)對(duì)4T1腫瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制。最后，根據(jù)趨化因子功能特點(diǎn)，將趨化因子作用顯著的結(jié)構(gòu)域組合起來(lái)，構(gòu)建了功能更顯著的抗腫瘤分子，可能為趨化因子用于腫瘤的生物學(xué)防治提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1．IP10的抗腫瘤作用及其機(jī)制 我們構(gòu)建了pcDNA3-IP10真核表達(dá)質(zhì)粒。電穿孔的方法將質(zhì)粒導(dǎo)入4T1細(xì)胞，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株4T1-IP10。雌性BALB／c小鼠及裸鼠皮下接種4T1-IP10細(xì)胞后形成的腫瘤較對(duì)照組生長(zhǎng)緩慢，腫瘤較小，重量較輕(P＜0.05)，并且4T1-IP10荷瘤小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，在4T1-IP10腫瘤組織中IP10表達(dá)水平顯著上調(diào)。我們觀察了IP10對(duì)淋巴細(xì)胞在腫瘤局部浸潤(rùn)的影響，結(jié)果表明，單位重量的4T1-IP10腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞數(shù)量是對(duì)照組的兩倍；免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，T淋巴細(xì)胞在4T1-IP10腫瘤內(nèi)浸潤(rùn)顯著增加；FACS分析腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的表型，結(jié)果顯示，4T1-IP10腫瘤內(nèi)CXCR3~+CD4~+T和CXCR3~+CD8~+T細(xì)胞比例均較對(duì)照組增高。將4T1-IP10腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞分離出來(lái)，體外經(jīng)特異性刺激后，增殖應(yīng)答能力和特異性殺傷活性增強(qiáng)，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞IFN-γ分泌明顯增加。以上結(jié)果提示，募集并增強(qiáng)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能在IP10介導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)抑制中具有重要的作用。我們進(jìn)一步觀察了腫瘤局部IP10表達(dá)對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響。體外特異性刺激后，4T1-IP10荷瘤小鼠的脾細(xì)胞抗原特異性增殖應(yīng)答能力及殺傷活性均較對(duì)照組顯著增高(P＜0.05)。腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤患者常見(jiàn)的死亡原因，誘導(dǎo)有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的策略之一。實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照比較，接種4T1-IP10的小鼠，經(jīng)尾靜脈注射4T1細(xì)胞后，大體標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，肺表面形成的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)顯著減少。4T1-IP10組小鼠肺重明顯減輕，肺組織內(nèi)轉(zhuǎn)移的細(xì)胞形成的克隆顯著減少(P＜0.05)。肺組織形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，4T1-IP10組肺組織內(nèi)僅有小的單一轉(zhuǎn)移病灶，而對(duì)照組轉(zhuǎn)移灶較大并且可以形成多發(fā)的轉(zhuǎn)移病灶。 以往研究表明IP10具有抗血管生成的作用，因此，我們觀察了IP10抗血管效應(yīng)在IP10介導(dǎo)的4T1腫瘤生長(zhǎng)抑制中的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨IP10濃度的增加，內(nèi)皮細(xì)胞增殖顯著受到抑制。劃痕實(shí)驗(yàn)表明，IP10能抑制bFGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的80％。小鼠cornea micro-porket模型研究表明，IP10能顯著抑制bFGF誘導(dǎo)的血管生成。將血管內(nèi)皮細(xì)胞在4T1-IP10腫瘤細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天，結(jié)果顯示，4T1-IP10腫瘤細(xì)胞的條件培養(yǎng)基能顯著延長(zhǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)周期，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖。腫瘤組織HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，在4T1-IP10腫瘤局部可以看到血管閉塞現(xiàn)象及腫瘤局灶性壞死，而對(duì)照組血管密度高，并可以看到大的血管腔，提示IP10能通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，抗腫瘤血管生成，使腫瘤局部缺血壞死，發(fā)揮抗腫瘤作用。 2．ITAC的抗腫瘤作用及其機(jī)制 我們通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3-ITAC的4T1細(xì)胞(4T1-ITAC)。將4T1-ITAC細(xì)胞在小鼠皮下接種，觀察腫瘤生長(zhǎng)狀況。結(jié)果顯示，在BALB／c小鼠及裸鼠體內(nèi)4T1-ITAC腫瘤生長(zhǎng)較對(duì)照組緩慢，腫瘤較小并且重量較輕(P＜0.05)，荷瘤小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。但是在裸鼠體內(nèi)4T1-ITAC生長(zhǎng)抑制作用沒(méi)有在BALB／c小鼠體內(nèi)明顯。提示T細(xì)胞可能參與了ITAC介導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)抑制。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，在4T1-ITAC腫瘤組織中ITAC表達(dá)水平顯著上調(diào)。為分析ITAC在腫瘤局部表達(dá)對(duì)腫瘤淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，我們分離并計(jì)數(shù)了腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，結(jié)果顯示，單位重量的4T1-ITAC腫瘤內(nèi)分離的淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著增加，是對(duì)照組的3倍。鑒于ITAC是CXCR3的配體，我們分析了CXCR3~+淋巴細(xì)胞在腫瘤內(nèi)的浸潤(rùn)情況。FACS分析表明，CXCR3~+淋巴細(xì)胞比例在4T1-ITAC腫瘤顯著增高，并且在4T1-ITAC腫瘤內(nèi)CXCR3~+CD4~+T和CXCR3~+CD8~+T淋巴細(xì)胞比例均高于對(duì)照組。對(duì)于ITAC是否影響被趨化的淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能尚未報(bào)道，因此，我們分析了在腫瘤局部表達(dá)的ITAC對(duì)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)4T1-ITAC腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，體外經(jīng)4T1特異性刺激后顯著增殖，殺傷活性較對(duì)照組明顯增強(qiáng)。ELISPOT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，4T1-ITAC腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞IFN-γ分泌增加(P＜0.05)。這些結(jié)果表明ITAC能促進(jìn)腫瘤淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，并增強(qiáng)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能，可能是ITAC介導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)抑制的機(jī)制之一。為進(jìn)一步確證ITAC的抗腫瘤效應(yīng)，我們檢測(cè)了荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。結(jié)果顯示，4T1-ITAC荷瘤小鼠的脾細(xì)胞特異性增殖反應(yīng)明顯增強(qiáng)，對(duì)4T1細(xì)胞的特異性殺傷活性增高(P＜0.05)。我們利用實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型檢測(cè)了4T1-ITAC荷瘤小鼠對(duì)4T1細(xì)胞在體內(nèi)播散轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果表明，接種4T1-ITAC腫瘤細(xì)胞的小鼠，其肺表面沒(méi)有明顯的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)形成，肺重明顯減輕。肺組織轉(zhuǎn)移細(xì)胞克隆形成顯著減少(P＜0.05)。肺組織HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，4T1-ITAC組未見(jiàn)明顯的轉(zhuǎn)移病灶形成。這些結(jié)果提示ITAC在腫瘤局部表達(dá)能保護(hù)小鼠，降低腫瘤播散轉(zhuǎn)移的發(fā)生率。 此外，我們檢測(cè)了ITAC的抗血管生成作用。劃痕實(shí)驗(yàn)表明ITAC能抑制bFGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的55％。MTT法檢測(cè)，隨ITAC濃度的增加，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制效果不明顯。與4T1細(xì)胞培養(yǎng)上清比較，4T1-ITAC細(xì)胞的條件培養(yǎng)基能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，但是與RPMI1640組比較沒(méi)有顯著差異。以上結(jié)果可能提示，ITAC具有一定的抗血管作用，并且參與了ITAC介導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)抑制，但不是主要的機(jī)制。 3．雙功能分子的設(shè)計(jì)及構(gòu)建 我們將先前的結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與IP10比較，ITAC具有較強(qiáng)的趨化作用及誘導(dǎo)抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用。與ITAC比較，IP10抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用更顯著。結(jié)構(gòu)功能分析表明，趨化因子的N端和N-LOOP區(qū)是結(jié)合及活化受體的關(guān)鍵部位，而趨化因子的C端可以結(jié)合在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，發(fā)揮抗血管生成的作用。結(jié)合以往文獻(xiàn)資料，我們?cè)O(shè)想ITAC的N端和N-LOOP區(qū)與IP10的C端融合，構(gòu)建一個(gè)新型融合分子，具有ITAC和IP10分子的各自優(yōu)點(diǎn)，有望產(chǎn)生更顯著的抗腫瘤治療效果。我們首先對(duì)雙功能分子進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬。將ITAC的N端和N-LOOP區(qū)與IP10的C端氨基酸序列輸入InsightⅡ工作站，模擬結(jié)果表明，兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組合后能形成趨化因子樣穩(wěn)定的空間構(gòu)象，與IP10的氨基酸同源性達(dá)到66％，與已有的IP10的晶體衍射結(jié)構(gòu)相似，RMS值為1.08。我們將該分子命名為雙功能分—ITIP。我們通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增得到雙功能分子ITIP的全長(zhǎng)編碼基因，構(gòu)建pcDNA3-ITIP質(zhì)粒，電穿孔法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染4T1細(xì)胞并篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株4T1-ITIP。RT-PCR結(jié)果表明僅在4T1-ITIP細(xì)胞中有ITIP的轉(zhuǎn)錄。趨化實(shí)驗(yàn)表明，4T1-ITIP細(xì)胞上清對(duì)淋巴細(xì)胞具有顯著趨化活性，并能被CXCR3抗體特異性阻斷，并且ITIP趨化活性與ITAC沒(méi)有差異，但是較IP10增強(qiáng)。這些結(jié)果提示4T1-ITIP細(xì)胞能分泌具有活性的ITIP蛋白。 4．雙功能分子的抗腫瘤作用及其機(jī)制 我們以4T1乳腺癌為模型研究了ITIP的抗腫瘤作用。BALB／c小鼠皮下接種5×10~4 4T1-ITIP腫瘤細(xì)胞后，成瘤率為3／10，而4T1-IP10及4T1-ITAC的成瘤率分別為7／10和6／10，對(duì)照組小鼠全部有腫瘤生成。將1×10~5 4T1-ITIP細(xì)胞皮下接種裸鼠，結(jié)果4T1-ITIP腫瘤與4T1-IP10腫瘤生長(zhǎng)較其余各組顯著減慢。可能提示ITIP具有抑制血管生成的作用，并且參與了ITIP的抗腫瘤效應(yīng)。但是在裸鼠體內(nèi)4T1-ITIP腫瘤抑制作用沒(méi)有在BALB／c小鼠體內(nèi)明顯，提示T細(xì)胞可能也參與了ITIP介導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)抑制。 我們分析了ITIP在腫瘤局部表達(dá)對(duì)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的影響。FACS分析腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，結(jié)果顯示，CXCR3~+淋巴細(xì)胞在4T1-ITIP腫瘤內(nèi)顯著增加，并且CXCR3~+CD4~+和CXCR3~+CD8~+T淋巴細(xì)胞比例均高于對(duì)照組。我們進(jìn)一步檢測(cè)了ITIP對(duì)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能的影響。在荷瘤小鼠體內(nèi)被動(dòng)轉(zhuǎn)移CFSE標(biāo)記的淋巴細(xì)胞后，在4T1-ITIP腫瘤內(nèi)CFSE標(biāo)記的淋巴細(xì)胞出現(xiàn)明顯的擴(kuò)增。將腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞在體外特異性刺激，4T1-ITIP腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞特異性增殖應(yīng)答能力及殺傷活性顯著增強(qiáng)，IFN-γ分泌明顯增加(P＜0.05)。我們還分析了4T1-ITIP荷瘤小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。4T1-ITIP荷瘤小鼠脾細(xì)胞在體外以4T1特異性刺激后，脾細(xì)胞特異性增殖反應(yīng)顯著增強(qiáng)，對(duì)4T1靶細(xì)胞的殺傷活性明顯增高(P＜0.05)。ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子分泌水平，結(jié)果表明，4T1-ITIP組小鼠脾細(xì)胞IFN-γ和TNF-α分泌顯著增加而IL-4分泌水平顯著降低。提示ITIP表達(dá)能增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，并向Th1型免疫應(yīng)答偏移。 為觀察ITIP對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，我們收集了4T1-ITIP細(xì)胞的培養(yǎng)上清，檢測(cè)4T1-ITIP細(xì)胞的培養(yǎng)基中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)變化。結(jié)果顯示，在4T1-ITIP腫瘤細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中，血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)顯著受到抑制，提示4T1-ITIP能分泌具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)活性的ITIP，發(fā)揮抗血管生成效應(yīng)。 綜上所述，抑制腫瘤血管生成并誘導(dǎo)有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答，是IP10及ITAC抗腫瘤的重要機(jī)制。增強(qiáng)IP10(ITAC)分子與其受體CXCR3的相互作用將有利于腫瘤的治療。更重要的是，通過(guò)以上研究，我們發(fā)現(xiàn)ITAC具有更顯著的趨化淋巴細(xì)胞及誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答的作用，而IP10具有更明顯的抗血管生成的作用。我們將ITAC分子的N端和N-LOOP區(qū)及IP10的C端結(jié)構(gòu)域組合，構(gòu)建的雙功能分子ITIP產(chǎn)生了更有效的抗腫瘤作用。本研究為臨床制定抗腫瘤生物治療策略提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，并為應(yīng)用趨化因子進(jìn)行腫瘤治療研究提供了新的思路。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

ITAC及雙功能分子誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫及機(jī)制研究第一部分醇，一20℃放置30分鐘，10000rpm離心10分鐘，棄上清，將沉淀用70%洗一次，即得到純化的PCR產(chǎn)物。將純化的PcR產(chǎn)物6ul與pUCm一T載體用T4DNA連接酶連接過(guò)夜。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DHS。，a一互補(bǔ)法篩選菌落，經(jīng)PCR及酶切鑒定IP10及工TAC插入pUClll--T后，以載體通用測(cè)序引上游引物分別與IP10及ITAC的上游及下游引物PCR鑒定插入片段的方向小。然后擴(kuò)增陽(yáng)性菌落，小量培養(yǎng)后提取重組質(zhì)粒工TAC一pUCmT和一pUCmT。再分別用EeoRV、BalnHI和EeoRI、Xhol雙酶切ITAC一pUCmT載體IO一pUCmT載體，將酶切片段用低熔點(diǎn)膠回收并純化。將酶切片斷與經(jīng)相應(yīng)的pcDNA3連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DHSQ，氨節(jié)青霉素篩選抗性菌經(jīng)PcR、酶切及測(cè)序鑒定證實(shí)成功構(gòu)建了pcDNA3一IP10和pcDNA3一ITAC真達(dá)質(zhì)粒。

ITAC及雙功能分子誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫及機(jī)制研究第一部分結(jié)果1.趨化因子在4ri細(xì)胞系表達(dá)變化RT一PCR方法擴(kuò)增16種趨化因子的基因編碼片段(圖1)，具有趨化效應(yīng)細(xì)胞功能的MIP一2、MIP一la、BRAK、SDF一1及抑制血管生成的PF4、BCA一1及既具有抗血管生成作用又能趨化效應(yīng)細(xì)胞的工P10和ITAC表達(dá)量較低。

LARC;lane16， BRAK;lane17，SDF一1.2.pcDNA3一IP10真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定將RT一PCR法擴(kuò)增到的34Obp的IP10基因編碼片段與peDNA3重組，如圖2所示，重組質(zhì)粒peDNA3一IP10經(jīng)pCR、反口尸了和肋01酶切及測(cè)序證明真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。340bPCCCATGGGCGGCCG以汀GCAG人C(認(rèn)GGTCTATAAGAATCCGGCCGCCAGGCATCCACTGTAACCACAGAAGGTAGCGTGGAG1，GTGCACGTGAC了叮人G人CAO幻妙汀人「l一fffC六TAGCCAAGTAG人ACAG窄叮AGATGT肖CGGACCTTCrAGAAAG口rTCTGCAGCCTGGTAATACGTGGCTGCATG丁C以AGACAGCAGAGGGTCAGJ門(mén)，CC丁GGC六CAGA口TCI，1.ATTGGAGGCTCA以CTCAGACGTTCCCAGGATGTCACATUI一l一王一fGACGC已汀人A兒認(rèn)TT公1一l丁I一曰一工一CTATI，GCCrGCA們認(rèn)TGAGGCGAGCI’ FGCrTGG人C了GGGGI.CC六GGCAC公I(xiàn)’l一r引，C萬(wàn)1’1一工人TGAGCCTT口、TAGT人AC人ATAC門(mén)，C共ACI一廠fGI

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐玲;銀屑病患者朗格漢斯細(xì)胞異常機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 郭軍慶;免疫細(xì)胞因子IP10-scFv的構(gòu)建及其抗腫瘤特性研究[D];武漢大學(xué);2003年

3 李剛;CXC趨化因子配體-10表達(dá)、純化及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

4 侯建梅;巨噬細(xì)胞炎癥蛋白3β（Mip3β）重組腺病毒疫苗抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

5 姚兵;Tumstatin基因的克隆、表達(dá)及其與吉西他濱聯(lián)合抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

6 宋金娜;血管生成素對(duì)黑色素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及對(duì)堿性成纖維生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[D];東北師范大學(xué);2006年

7 常穎;趨化因子CCL18在過(guò)敏性疾病發(fā)病機(jī)理中的作用[D];吉林大學(xué);2006年

8 朱惠芳;SCID同源導(dǎo)入近交系615-SCID小鼠的培育及其生物學(xué)特性與初步應(yīng)用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

9 白曉霞;妊娠早期子宮微環(huán)境趨化因子表達(dá)及其生物學(xué)意義的研究[D];山東大學(xué);2006年

10 楊世昕;趨化因子受體CXCR4在惡性膠質(zhì)瘤侵襲和血管生成中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 王建有;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清趨化因子MCAF和RANTES的測(cè)定及其臨床意義[D];浙江大學(xué);2001年

2 李泉;RANTES在銀屑病患者角質(zhì)形成細(xì)胞及外周血中的表達(dá)及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 李峰;應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選IgA腎病患者腎穿組織相關(guān)基因的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2808548