非免疫性腎病是臨床常見疾病，發(fā)病率逐年升高，但缺乏特異性治療。組織病理學(xué)研究顯示，非免疫性腎病常伴腎間質(zhì)纖維化，晚期常發(fā)展為慢性腎功能衰竭。進(jìn)一步闡明非免疫性腎病的發(fā)病機(jī)制為尋找該病的有效治療提供新的思路。業(yè)已表明共刺激信號在免疫性腎病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用，采用共刺激信號干預(yù)性治療在實驗中也取得令人鼓舞的效果。近年在非免疫性腎病腎臟組織中也發(fā)現(xiàn)有巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的浸潤，共刺激分子在腎固有細(xì)胞上的表達(dá)，這些均表明非免疫性腎病病理機(jī)制可能與共刺激信號和免疫活性細(xì)胞參與有密切的關(guān)系，但相關(guān)研究卻鮮有報道。鑒此，本文以小鼠葉酸性腎病(FAN)為研究對象，系統(tǒng)地分析了共刺激分子以及淋巴細(xì)胞在葉酸性腎病病理過程中的動態(tài)變化，在此基礎(chǔ)上，運用共刺激分子4-1BB激發(fā)型抗體進(jìn)行干預(yù)性實驗治療，探討FAN的可能免疫病理機(jī)制和4-1BB抗體干預(yù)治療的潛在機(jī)制，為非免疫性腎病新的治療提供理論和實驗依據(jù)。 一．小鼠葉酸性腎病免疫病理機(jī)制的探討 小鼠葉酸性腎病模型是研究腎功能衰竭和腎間質(zhì)纖維化的模型，該病主要由于小鼠注射葉酸后，在腎小管內(nèi)形成結(jié)晶引起急性小管壞死。有研究顯示在葉酸性腎病的發(fā)生發(fā)展過程中伴有共刺激分子的異常表達(dá)，但免疫病理機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。本文通過小鼠葉酸性腎病模型，收集標(biāo)本：血上清、腎臟和脾臟，分別行腎功能檢測，免疫組織化學(xué)染色以及淋巴細(xì)胞細(xì)胞分離和T細(xì)胞亞群檢測分析。 實驗結(jié)果顯示：小鼠病理過程經(jīng)歷兩個階段，早期，小鼠的Bun和Cr顯著高于正常組，死亡率達(dá)到49％；晚期，小鼠的Bun和Cr開始下降，總死亡率達(dá)到60％。 激發(fā)型抗4一IBB單克隆抗體對小鼠葉酸性腎病的干預(yù)治療及其機(jī)制探討 中文摘要 且在整個病理過程伴有細(xì)胞浸潤，晚期巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞大量浸潤于腎間質(zhì)和腎纖 維化區(qū)域。有趣的是4一扭B在整個病理過程中出現(xiàn)兩次高表達(dá)，在實驗第3天，4一IBB 高表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞上，之后有所下降，但在實驗第21天，4一IBB又呈高表達(dá)。 T細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果顯示，在早期CD3十、CD4+T淋巴細(xì)胞百分率顯著高于正常組; 在晚期，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞百分率顯著低于正常組，但CDS+T淋巴細(xì)胞百分率 在整個疾病過程中卻未有顯著性變化。 上述結(jié)果顯示，葉酸性腎病的病程涉及免疫應(yīng)答截然不同的兩個時期，即早期 的急性腎功能衰竭期，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答和程度增強(qiáng);隨后的 晚期即慢性腎功能衰竭期，免疫應(yīng)答低下。整個疾病進(jìn)程中都伴有4一IBB等共刺激 分子的上調(diào)表達(dá)，CD4+T細(xì)胞亞群主要介導(dǎo)了孫創(chuàng)發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的免疫應(yīng)答。 二.激發(fā)型抗4一IBB單克隆抗體對小鼠葉酸性腎病的干預(yù)治療及其機(jī)制探討 本文運用4一IBB激發(fā)型抗體治療小鼠葉酸性腎病，從而進(jìn)一步探討共刺激4一IBB 信號在疾病中的作用，為非免疫性腎病的治療提供新的途徑。 小鼠腹腔注射抗4一IBB抗體以治療葉酸性腎病，取材，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色， FCM檢測，腎功能檢測。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，干預(yù)治療后，小鼠腎臟病變明顯改善，擴(kuò) 張和萎縮的腎小管、腎間質(zhì)纖維化的區(qū)域明顯縮小，病變區(qū)域也只呈現(xiàn)局部分布， 死亡率也從60%下降到29%，并能恢復(fù)小鼠的Bun、Cr水平和減少巨噬細(xì)胞的浸潤。 值得注意的是，干預(yù)治療后，降低了CD40在腎小管上皮細(xì)胞上的高表達(dá)，但對于高 表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞上的B7一1卻無明顯作用。此外，抗4一IBB抗體的干預(yù)治療對 小鼠的免疫應(yīng)答和強(qiáng)度也有一定的影響。前已發(fā)現(xiàn)，葉酸小鼠的免疫應(yīng)答在急性期 明顯亢進(jìn)，而在后期則表現(xiàn)為明顯的低下狀態(tài)�？贵w干預(yù)治療后第3天，小鼠CD3+、 CD4+T淋巴細(xì)胞百分率低于FA組，且與FA組有顯著差別，CD3、CD4的表達(dá)量己 接近正常組。干預(yù)后第14天，小鼠CD3+、CD4+T琳巴細(xì)胞百分率高于FA組，且與 FA組有顯著差別，CD3、CD4的表達(dá)量已接近正常組。但在干預(yù)治療過程中，CDS 的表達(dá)率卻未發(fā)生顯著變化。 上述結(jié)果顯示，運用4一IBB激發(fā)型抗體干預(yù)治療小鼠葉酸性腎病，小鼠腎臟在 組織學(xué)上得到了改善，浸潤細(xì)胞減少，小鼠CD3十、CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答 激發(fā)型抗4-IBB單克隆抗體對小鼠葉酸性腎病的干預(yù)治療及其機(jī)制探討 中文摘要 和強(qiáng)度都得到改善，下調(diào)了CD40在腎小管上皮細(xì)胞上的表達(dá)。因此，抗4一IBB抗 體的干預(yù)治療FAN能明顯保護(hù)腎臟功能。 小結(jié) 綜上所述，本研究率先運用小鼠葉酸性腎病這個非免疫性腎病模型為研究對象， 初步探討了其免疫病理機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葉酸性腎病的病程涉及早期的急性腎衰期和 晚期的慢性腎衰期，伴有共刺激分子的異常表達(dá)，且在急性和慢性期的免疫應(yīng)答狀 態(tài)和強(qiáng)度都發(fā)生截然不同的變化。在此基礎(chǔ)上，運用了4一IBB激發(fā)型抗體進(jìn)行干預(yù) 治療，發(fā)現(xiàn)抗4一IBB抗體的干預(yù)治療能恢復(fù)Bun和Cr水平，減少細(xì)胞浸潤，改善免 疫應(yīng)答狀態(tài)和強(qiáng)度，保護(hù)腎臟功能，為非免疫性腎病提供了新的理論和實驗依據(jù)。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

在后期表現(xiàn)為慢性腎功能不全(注射葉酸后14天)，慢性期病變腎組織呈現(xiàn)明顯腎固縮，顏色蒼白，表面顆粒化，切面可見明顯的硬化。常規(guī)HE染色可見硬化和纖維化區(qū)域(圖1)。第3天小鼠死亡率達(dá)48.57%，而第14天，小鼠總死亡率達(dá)60%(表l)。表1小鼠第3、14天Bun、Cr及死亡率的比較Ind巴dGrouPCr(協(xié)ma切刁Bun(燈雙n。比)Mo比血yCO幻燈DlD3D1436.石士石.311.03土1.08D148.17士34.2283.79土1.248.5溉(17/35)73.79士3.93即.02土2.256D%(2113勻注:D3表示葉酸注射后第3天，D14表示葉酸注射后第14天2.2免疫活性細(xì)胞在葉酸性腎病組織的浸潤小鼠注射葉酸后，第3天尚未見巨噬細(xì)胞浸潤;第14天，腎小管間質(zhì)、腎臟纖維化區(qū)域可見大量的巨噬細(xì)胞的浸潤(圖ZB);T細(xì)胞在第3天便有浸潤，至第14天，可見大量T細(xì)胞的浸潤于腎間質(zhì)和腎纖維化區(qū)域(圖ZD)

圖2巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞在腎臟中的浸潤，蘇木素復(fù)染。A代表正常小鼠腎臟，未見有巨噬細(xì)胞的浸潤。B代表第14天時，葉酸性腎病小鼠腎臟中，可見大量巨噬細(xì)胞的浸潤.C代表正常小鼠腎臟，也未發(fā)現(xiàn)有T淋巴細(xì)胞的浸潤。D代表第14天時，葉酸性腎病小鼠腎臟中，可見大量T淋巴細(xì)胞的浸潤(x400)。

圖34-IBB在腎臟中的表達(dá)，蘇木素復(fù)染。A代表正常組，未見有4一IBB表達(dá);B代表葉酸注射后第1天，可見4一IBB開始表達(dá);C代表葉酸注射后第3天，4一IBB己高表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞;D代葉酸注射后表第7天4一IBB表達(dá)有所下降;E代表葉酸注射后第14天，可見4一IBB又開始上調(diào)表達(dá);F代表葉酸注射后第21天，腎小管上皮細(xì)胞上4一1BB的表達(dá)又呈高表達(dá)(x400)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 戴繼鴻,李曉忠,殷洪二,徐穎,李文香,張學(xué)光;共刺激分子在小鼠葉酸性腎病組織中的表達(dá)及其免疫病理意義[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2005年01期

本文編號：2807933