【摘要】：人神經(jīng)型一氧化氮合酶(hnNOS)可以催化電子從供體NADPH傳遞給醌類抗腫瘤藥物阿霉素(Adr)�；罨蟮腁dr因引起嚴重的心血管毒性而限制其臨床藥用。我們對hnNOS催化的阿霉素單電子還原作用機制進行了研究。 我們成功構(gòu)建了hnNOS全長酶在大腸桿菌中的表達系統(tǒng)，層析法純化得到大量高純度的酶，對其進行了性質(zhì)鑒定。發(fā)現(xiàn)用于表達細胞色素P450還原酶的原核表達系同樣適用于hnNOS；hnNOS與鼠nNOS的性質(zhì)相似。然后，進一步用全長酶，和它的還原酶結(jié)構(gòu)域(FAD結(jié)合結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)AD／FMN結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，在有氧條件下對Adr進行了催化反應，觀察和研究了反應過程中的吸光度的改變。實驗數(shù)據(jù)顯示，hnNOS可以催化有氧狀態(tài)下，Adr對NADPH的氧化作用；鈣離子／鈣調(diào)蛋白(Ca~(2+)／CaM)結(jié)合可以促進Adr對NADPH的氧化作用；無論有無Ca~(2+)／CaM，黃素半醌均為反應的主要中間產(chǎn)物；不論是FAD半醌(FADH~·)，還是空氣穩(wěn)定半醌(FAD-FMNH~·)均不能與阿霉素迅速反應。這些實驗數(shù)據(jù)說明，在Ca~(2+)／CaM存在的條件下，單電子受體Adr主要從FMN處接受電子；雙電子還原半醌(FADH_2／FMN和FAD／FMNH_2)，和三電子還原半醌(FADH_2／FMNH~·和FADH~·／FMNH_2)是反應中的活性形式，均可以迅速傳遞單電子給電子受體�？偨Y(jié)以上實驗結(jié)果，得出以下結(jié)論：我們構(gòu)建的表達系和純化方法適用于表達hnNOS；hnNOS在醌類藥物的生物轉(zhuǎn)化過程中起著重要的作用；Ca~(2+)／CaM通過促進分子間電子傳遞加速了hnNOS對Ca~(2+)／CaM的單電子還原作用。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R341

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