發(fā)布時間：2020-07-16 17:58

【摘要】： 腦缺血梗死灶的定量分析，目前主要通過經(jīng)典的蘇木精-伊紅(HE)染色和氯化三苯四氮唑(TTC)染色等方法。但HE染色須經(jīng)過組織固定；TTC染色主要檢測缺血24小時總梗死區(qū)，對缺血后4～6h內(nèi)和36h后能否確定梗死區(qū)還有爭議。而且，經(jīng)HE或TTC染色的腦片就不能進(jìn)一步作生物化學(xué)、組織學(xué)和免疫組織化學(xué)研究。為尋找評價局灶性腦缺血模型梗死程度更為簡便、定量的新方法，本課題探索了透光法評定局灶性腦缺血模型梗死體積的方法，分析透光法測定的腦梗死體積與神經(jīng)癥狀評分的相關(guān)性，并將透光測得的梗死區(qū)域與HE染色所觀察的存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較。此外，透光法結(jié)合神經(jīng)癥狀評分和HE染色還用于評價白三烯受體拮抗劑ONO-1078{pranlukast，4-氧-8-[對-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基]-2-(5-四唑基)-4H-1-苯并吡喃半水合物}對小鼠局灶性腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法： 成年雄性NIH小鼠60只，隨機(jī)分成手術(shù)組(n=40)和假手術(shù)組(n=20)。手術(shù)組采用大腦中動脈阻塞法(MCAO)誘導(dǎo)小鼠持續(xù)性局灶性腦缺血，假手術(shù)組僅暴露頸總動脈作為對照。于手術(shù)后24h，進(jìn)行Bederson's癥狀評分和爬板、懸掛試驗，然后處死取腦，切成1mm厚的冠狀腦片，每一腦片先在體視顯微鏡下進(jìn)行透光，圖像輸入計算機(jī)；然后，在0.5％氯化三苯四氮唑(TTC)溶液中37℃孵育30min，并將 浙江人學(xué)碩＿卜學(xué)位論文 TTC染色的腦片圖像輸入計算機(jī)。以AnalyPowerl刀軟件計算每一腦片以透光法為］ TfC染色法測得的梗死體積，以 PhotOShop 5乃計算缺血組和對照組透光利 TTC染色 腦片左右側(cè)灰度。將第5片腦片切成spin冰凍切片，常規(guī)HE染色后，光鏡下觀察并 通過攝像頭將鏡下圖像（X 600）輸入計算機(jī)，對皮層、皮層下的存活神經(jīng)元進(jìn)行計 數(shù)。 在另一絹實驗中，ONO－1078組（n—15）和對照組（n—14）分別丁人腦中動脈線 栓手術(shù)前3大利術(shù)前h＠腔注射ONO叫 0．ling·kg’或生理鹽水，觀察 ONO－1078的神經(jīng)保護(hù)作用。 結(jié)果： 在透光試驗中，正常腦片組織較為透明，缺血區(qū)域明顯變暗、灰度增加，TTC 染色腦片正常組織為深紅色，缺血區(qū)域變白、灰度降低。透光測定的腦梗死體積與 ＊＊C染色測定的梗死體積具有較好的相關(guān)性（r＝0809，P＜0刀01）。缺血組小鼠透光 和 TTC染色測得的缺血側(cè)人腦平均灰度、皮層灰度、皮層下灰度和海馬灰度，與非 缺血側(cè)相應(yīng)部位及對照組相應(yīng)部位比較有顯著差異（尸＜0001），對照組腦片左右側(cè) 及對照組與缺血組非缺血側(cè)比較無顯戈差異（P＞OO引。缺血組小鼠神經(jīng)癥狀綜合評 分與對照組比較有顯著差異（尸＜0刀01）：透光法測得的梗死體積與練合評分法評定 的神經(jīng)汕狀之問只有等級柏關(guān)（Fs＝0694，P＜0001）。缺血組HE染色腦片皮層和皮層 卜存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)與對照組比較明顯減少（尸＜0刀01）。 透光法測得的ONO－1078組小鼠總梗死體積、皮層梗死體積和皮層卜梗死體積分 別為14．8士23．7、6．81土12．0、7．95ill．gmm’，對照組分別為48．5f40．9、23．0i28．8、 25．4土15．3 mm’，提不 ONO－1078能減少腦梗死體積。用 Bederson，s癥狀評分法和神 經(jīng)癥狀綜合評分法評定的＊NO．1078組小鼠的神經(jīng)癥狀均較對照組輕（分別為P＜ 0刀5和P＜0刀1）。＊＊＊－1078明顯減低腦半球面積的右／左比值（尸＜0刀5），提示其能 減輕腦水腫。ONO－1078組小鼠 HE染色腦片皮層下存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)比對照組明顯增 多（尸＜0刀5）。 2 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)論： l 透光測定的小鼠腦梗死體積與TTC染色測定的梗死體積具有較好的相關(guān)性。 2 透光法測得的梗死體積與綜合評分法評定的神經(jīng)癥狀評分之間具有等級相關(guān)。 3 缺血小鼠HE染色腦片缺血側(cè)皮層和皮層下存活神經(jīng)細(xì)胞數(shù)明顯減少，與透光法 觀察的神經(jīng)損傷相一致。 4 透光法可川于局灶性腦缺血的定量分折，也可用來確定神經(jīng)保護(hù)藥 ONO－1078的 神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R-332

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1 沈麗明;范業(yè)宏;;一氧化氮、一氧化氮合酶與腦缺血性損傷[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2011年07期

2 張欣;丁v

本文編號：2758315