發(fā)布時(shí)間：2017-03-28 12:05

  本文關(guān)鍵詞：綿羊臍帶和羊水間充質(zhì)干細(xì)胞的分禽培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Msenchymal stem cells, MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞。MSCs存在于動(dòng)物胎兒和成體多種組織中,目前已經(jīng)從多個(gè)物種的多種組織中提取分離出MSCs,而研究最多的MSCs主要是骨髓源的MSCs。本研究以綿羊臍帶和羊水組織為材料來(lái)源,分別采用酶消化法和離心分離法培養(yǎng)獲得目的細(xì)胞,并大量?jī)龃媪说谌募?xì)胞。然后,以第五代細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,對(duì)得到的細(xì)胞進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)性能、表面標(biāo)志等方面的鑒定,最后,進(jìn)行成脂、成骨、成軟骨的誘導(dǎo)分化,驗(yàn)證其多能性。結(jié)果顯示分離得到的細(xì)胞形態(tài)均一,呈現(xiàn)成纖維樣細(xì)胞形態(tài),增殖能力旺盛,在體外傳代培養(yǎng)至20代時(shí)細(xì)胞仍然保持良好的生物學(xué)性狀；傳代至第20代時(shí),仍具有正常二倍體核型(2n=54)；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示細(xì)胞表達(dá)表面標(biāo)記CD13、CD29、CD44、CD90和CD106,不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志基因CD45。結(jié)果表明本研究分離得到的細(xì)胞具備MSCs的生物學(xué)特性。進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞染色及實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)驗(yàn)證了其體外誘導(dǎo)分化能力,結(jié)果顯示：成脂誘導(dǎo)后,細(xì)胞經(jīng)油紅-O染色可見(jiàn)明顯脂滴,RT-PCR顯示成脂細(xì)胞特異性基因硬脂酰CoA去飽和酶(SCD)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體G(PPARG)表達(dá)呈陽(yáng)性；成骨誘導(dǎo)后,經(jīng)AgN03染色后可見(jiàn)鈣鹽沉積,實(shí)時(shí)定量PCR顯示成骨細(xì)胞特異性基因膠原蛋白Ⅰ(BGLAP)表達(dá)呈陽(yáng)性；成軟骨誘導(dǎo)后,經(jīng)阿利新藍(lán)染色后呈藍(lán)色,PCR顯示成軟骨特異基因光蛋白聚糖(LUM)和雙鏈蛋白聚糖(BGN)表達(dá)呈陽(yáng)性,以上結(jié)果表明所分離的MSCs可以成功向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化。綜上所述,我們成功建立了綿羊MSCs分離、純化及鑒定平臺(tái),得到了綿羊臍帶和羊水MSCs,有望用于后續(xù)研究。
【關(guān)鍵詞】：綿羊 臍帶 羊水 間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 縮略詞及中英文對(duì)照表9-11
• 第一章 綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展11-25
• 一、MSCs的生物學(xué)特征11-14
• 1.1 MSCs的來(lái)源及定義11-12
• 1.2 MSCs的表面標(biāo)志12-13
• 1.3 MSCs的可塑性13
• 1.4 MSCs的免疫原性13-14
• 二、綿羊MSCs的生物學(xué)特性14-15
• 2.1 綿羊MSCs的來(lái)源14
• 2.2 綿羊MSCs的表面標(biāo)志14-15
• 2.3 綿羊MSCs可塑性15
• 三、綿羊MSCs的應(yīng)用研究15-17
• 3.1 骨缺陷的應(yīng)用16-17
• 3.2 瓣膜缺陷的應(yīng)用17
• 3.3 其他應(yīng)用17
• 四、存在的問(wèn)題以及前景17-18
• 參考文獻(xiàn)18-25
• 第二章 綿羊臍帶和羊水間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定25-45
• 一、引言25-26
• 二、實(shí)驗(yàn)材料和方法26-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器26-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-36
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-44
• 3.1 形態(tài)學(xué)觀察36-37
• 3.2 第20代細(xì)胞核型37-38
• 3.3 增殖能力檢測(cè)38-39
• 3.4 表面標(biāo)志檢測(cè)39-40
• 3.5 體外多向分化能力檢測(cè)40-44
• 四、討論44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50

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