本文關(guān)鍵詞：人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型構(gòu)建及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:人腫瘤壞死因子α(hTNFα)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)病程中起著刺激和放大炎癥的關(guān)鍵作用,藥物阻斷其活性可有效緩解RA病情,是RA治療中重要的藥物靶點(diǎn)。本研究通過(guò)構(gòu)建hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠,并從臨床癥狀、病理特征和細(xì)胞因子檢測(cè)等方面系統(tǒng)性地對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠的表型進(jìn)行評(píng)價(jià),篩選獲得具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床特征的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,并在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用該模型對(duì)臨床前(AT132)和市售(Adalimumab和Infliximab)的hTNFα單抗藥物以及化學(xué)合成藥物(鹽酸青藤堿)開展藥效學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn),為該hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎新藥篩選提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:利用重組hTNFα/β-球蛋白(globin)轉(zhuǎn)基因載體,獲得hTNFα轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠,通過(guò)定期對(duì)該小鼠體重和關(guān)節(jié)炎臨床癥狀進(jìn)行評(píng)價(jià);觀察小鼠病程發(fā)展過(guò)程中關(guān)節(jié)組織和器官病理改變;hTNFα在小鼠關(guān)節(jié)組織及器官中的免疫組織化學(xué)表達(dá)定位;對(duì)小鼠血清和關(guān)節(jié)滑膜中hTNFα、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-15、IL-17、m TNFα、IFNγ和GM-CSF等細(xì)胞因子進(jìn)行流式細(xì)胞定量分析,最終篩選獲得具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床特征的hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠模型。應(yīng)用該模型,通過(guò)臨床觀察、病理檢測(cè)以及hTNFα定量分析,對(duì)臨床前(AT132)和市售(Adalimumab和Infliximab)的hTNFα單抗藥物以及化學(xué)合成藥物(鹽酸青藤堿)開展抗RA藥效學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)、抗RA量效分析等實(shí)驗(yàn),為該hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎新藥篩選提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。結(jié)果:1.建立htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型。通過(guò)基因組pcr鑒定得到的fvb背景htnfα轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠均表現(xiàn)出關(guān)節(jié)炎癥狀。體重:較fvb近交系小鼠,在出生后4~18周的觀察期內(nèi),htnfα轉(zhuǎn)基因小鼠體重增長(zhǎng)緩慢。臨床癥狀:隨年齡增長(zhǎng),htnfα轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出關(guān)節(jié)腫脹變形,握力下降,整體靈活性減低,關(guān)節(jié)僵硬,活動(dòng)嚴(yán)重受損等關(guān)節(jié)炎相關(guān)的臨床癥狀。病理特征:htnfα轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)在膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)和腕關(guān)節(jié)等多個(gè)關(guān)節(jié)出現(xiàn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理改變,主要表現(xiàn)為炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),滑膜增生,血管翳和破骨細(xì)胞的出現(xiàn),滑膜細(xì)胞纖維化,最終導(dǎo)致軟骨和骨的破壞。而其他組織器官未見異常。htnfα免疫組化定位:關(guān)節(jié)滑膜組織異常高表達(dá)htnfα,同時(shí),其他部分組織器官中也存在htnfα陽(yáng)性反應(yīng)。細(xì)胞因子檢測(cè):與wt鼠比較,htnfα轉(zhuǎn)基因鼠關(guān)節(jié)滑膜中htnfα表達(dá)異常升高(p0.01),血清中htnfα以及血清和關(guān)節(jié)滑膜中的il-1α、il-1β、il-2、il-4、il-5、il-6、il-12、il-15、il-17、鼠源tnfα、ifnγ和gm-csf表達(dá)未見顯著差異。2.htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型應(yīng)用。at132:抗htnfα單抗藥物Αt132(30mg/kg)治療htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠10周,htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠癥狀被抑制,關(guān)節(jié)滑膜組織中htnfα表達(dá)量顯著降低,藥物治療有效。對(duì)at132進(jìn)行量效關(guān)系評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn),當(dāng)給藥劑量為1.25mg/kg和0.625mg/kg時(shí)仍能表現(xiàn)很好的臨床治療效果,當(dāng)給藥劑量降低到0.312mg/kg和0.156mg/kg時(shí),at132治療無(wú)效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)htnfα小鼠有效的Αt132給藥劑量為≥0.625mg/kg。adalimumab:不同濃度抗htnfα單抗藥adalimumab(12mg/kg、6mg/kg、3mg/kg)治療htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠8周,htnfα小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀均被抑制,關(guān)節(jié)滑膜組織中htnfα表達(dá)量顯著降低,藥物治療有效。infliximab:不同濃度抗htnfα單抗藥infliximab(60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg)治療htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠8周,htnfα小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀均被抑制,關(guān)節(jié)滑膜組織中htnfα表達(dá)量顯著降低,藥物治療有效。.鹽酸青藤堿:藥物治療htnfα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠4周,htnfα小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀未被抑制,關(guān)節(jié)滑膜組織中htnfα表達(dá)量無(wú)顯著差異,該小鼠對(duì)青藤堿治療不敏感。結(jié)論:1.成功建立了hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型,并獲得了該模型在體重、臨床表現(xiàn)、病理特征、細(xì)胞因子水平等與關(guān)節(jié)炎密切相關(guān)的重要表型指標(biāo),為模型應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。2.利用該模型,系統(tǒng)地對(duì)臨床前hTNFα單抗藥物AT132進(jìn)行了系統(tǒng)地藥效學(xué)和量效關(guān)系評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)AT132((30 mg/kg))治療hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠有效,且最低起效濃度為0.625mg/kg。3.利用該模型對(duì)市售用于RA治療的hTNFα單抗藥物(Adalimumab和Infliximab)以及非hTNFα單抗藥物(鹽酸青藤堿)進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)后,證明本研究所使用單抗藥物和劑量在該模型上均有效,而非單抗藥物對(duì)該模型的臨床癥狀并無(wú)改善作用。
【關(guān)鍵詞】：人腫瘤壞死因子(hTNFα)轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型 ΑT132 Infliximab Adalimumab 鹽酸青藤堿 藥效評(píng)價(jià)
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 1 前言13-17
• 1.1 研究背景13-15
• 1.2 研究目的15
• 1.3 研究?jī)?nèi)容15-17
• 第一部分：h TNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型構(gòu)建17-33
• 2 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 2.1 主要儀器設(shè)備17
• 2.2 主要試劑17-18
• 3 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 3.1 hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠模型構(gòu)建18
• 3.2 hTNFα轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠的鑒定18-19
• 3.3 hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠日常狀態(tài)的觀察及關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)定19
• 3.4 hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠標(biāo)本的采集以及處理19-20
• 3.5 hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)、心、肝、脾、肺、腎、腦的病理檢測(cè)20-21
• 3.6 免疫組化法檢測(cè)h TNFα轉(zhuǎn)基因小鼠中h TNFα的表達(dá)21-22
• 3.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)h TNFα轉(zhuǎn)基因小鼠滑膜和血清中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-15、IL-17、TNFα、IFNγ和GM-CSF的表達(dá)水平22-23
• 3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-29
• 4.1 hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定23
• 4.2 轉(zhuǎn)基因小鼠的體重變化23-24
• 4.3 轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)炎的臨床癥狀24-25
• 4.4 轉(zhuǎn)基因小鼠的病理改變25-26
• 4.5 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠各臟器的h TNFα表達(dá)26-28
• 4.6 免疫細(xì)胞因子的變化28-29
• 5 討論29-33
• 5.1 hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型的構(gòu)建29-30
• 5.2 hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠病理學(xué)改變30-31
• 5.3 hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠的細(xì)胞因子變化31-33
• 第二部分h TNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型應(yīng)用33-50
• 2 實(shí)驗(yàn)材料33
• 2.1 主要儀器設(shè)備33
• 2.2 主要藥品33
• 2.3 主要試劑33
• 2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件33
• 3 實(shí)驗(yàn)方法33-36
• 3.1 實(shí)驗(yàn)分組、給藥方式和劑量33-35
• 3.2 hTNFα小鼠日常狀態(tài)的觀察及關(guān)節(jié)炎評(píng)分35
• 3.3 hTNFα小鼠標(biāo)本的采集以及處理35
• 3.4 hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦、關(guān)節(jié)病理檢測(cè)35
• 3.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)血清中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-15、IL-17、TNFα、IFNγ 和GM-CSF的表達(dá)水平檢測(cè)35
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理35-36
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-47
• 4.1 藥物抑制hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)炎臨床36-41
• 4.2 AT132治療后對(duì)hTNFα轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)及重要組織器官病理影響41-45
• 4.3 TNFa單抗藥物治療對(duì)h TNFα轉(zhuǎn)基因小鼠關(guān)節(jié)滑膜和血清中hTNFα表達(dá)的影響45-47
• 5 討論47-50
• 5.1 ΑT132對(duì)h TNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠的影響47-48
• 5.2 不同濃度Infliximab治療hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠效果48-49
• 5.3 不同濃度Adalimumab治療hTNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠效果49
• 5.4 鹽酸青藤堿治療h TNFα轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠效果49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述56-64
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 致謝64-65
• 附錄一：縮寫詞中英文對(duì)照65-66
• 附錄二：攻讀學(xué)位期間完成論文及獲獎(jiǎng)情況66

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王維;淋巴細(xì)胞JAM-A在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用研究[D];云南大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型構(gòu)建及應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：271874