本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)rtI233V變異的演變及病毒學(xué)特點(diǎn)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)rtI233V變異的演變規(guī)律及其與阿德福韋酯(ADV)耐藥的相關(guān)性。方法分析了9830例慢性HBV感染者血清樣本中HBV rtI233V變異的檢出率。選擇其中2例代表性患者的動(dòng)態(tài)收集血清樣本,擴(kuò)增HBV RT基因并克隆測(cè)序(20個(gè)克隆/樣本)以觀察rtI233V變異的演變過(guò)程。構(gòu)建pTriEx-HBV1.1倍野生株(WT)、3種臨床變異株(rtI233V、rtN236T、rtI233V+rtN236T)和定點(diǎn)回復(fù)突變株(rtN236T)復(fù)制子,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入HepG2肝癌細(xì)胞,分別加入不同濃度梯度或最高濃度的拉米夫定(LAM)、阿德福韋酯(ADV)、恩替卡韋(ETV)和替諾福韋(TDF)作用,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同藥物濃度作用后細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBV DNA水平,分析變異病毒復(fù)制力與表型耐藥變化特點(diǎn)。結(jié)果9830例慢乙肝患者血清樣本中共檢出rtI233V位點(diǎn)變異28例,檢出率為0.28%,其中rtI233V單獨(dú)變異19例,與rtN236T等經(jīng)典耐藥變異聯(lián)合出現(xiàn)9例。該變異的檢出患者均有ADV治療史,其中16例(57.1%)接受ADV單藥治療6個(gè)月以上,12例(42.9%)接受包括ADV的多藥序貫聯(lián)合治療1年以上�；颊�1相對(duì)病毒復(fù)制力與表型耐藥分析顯示,rtI233V變異株的復(fù)制力與野生株接近(98.2%),rtN236T變異株則較野生株顯著降低(55.4%);rtI233V+rtN236T變異株的相對(duì)病毒復(fù)制力為野生株的100.4%,表明rtI233V變異可明顯恢復(fù)rtN236T變異株受損的復(fù)制力;rtN236T、rtI233V+rtN236T和rtI233V變異株對(duì)ADV的敏感性分別為野生株的1/6.82,1/5.28和1/1.57,rtN236T和rtI233V+rtN236T變異株對(duì)ADV耐藥,而rtI233V變異株對(duì)ADV仍然敏感,與rtN236T聯(lián)合變異對(duì)ADV耐藥性的影響不大�；颊�2:rtI233V變異株的相對(duì)病毒復(fù)制力為野生株的102.5%;對(duì)ADV的敏感性為野生株的1/0.76。rt I233V變異株對(duì)ADV及LAM、ETV和TDF均敏感。ADV對(duì)臨床變異株rtI233V+rtN236T和定點(diǎn)回復(fù)突變株rtN236T(lab)的抑制率相似,進(jìn)一步證實(shí)rtI233V變異株對(duì)ADV耐藥性影響不大。結(jié)論rtI233V位點(diǎn)變異與ADV應(yīng)答不佳相關(guān),但不直接降低病毒對(duì)ADV的敏感程度,可以恢復(fù)經(jīng)典ADV耐藥病毒株的復(fù)制力,是一種復(fù)制力補(bǔ)償變異。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 阿德福韋酯 基因變異 復(fù)制力 耐藥性
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R373.21
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對(duì)照表10-12
• 前言12-13
• 1 對(duì)象與方法13-33
• 1.1 研究對(duì)象13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器13
• 1.3 主要試劑13-14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 1.5 HBV DNA巢式PCR擴(kuò)增15-17
• 1.6 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)17
• 1.7 HBV DNA的克隆及測(cè)序分析17-22
• 1.8 定點(diǎn)突變22-24
• 1.9 pTriEx-HBV(C) 1.1 倍重組載體的構(gòu)建及鑒定24-28
• 1.10 轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒的提取及濃度的測(cè)定28-30
• 1.11 分板、轉(zhuǎn)染30-32
• 1.12 重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞并加藥培養(yǎng)32
• 1.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理32-33
• 2 結(jié)果33-43
• 2.1 臨床樣本資料和r t I 23 3 V變異檢出分析33
• 2.2 例典型CHB患者PCR擴(kuò)增產(chǎn)物33-34
• 2.3 擴(kuò)增產(chǎn)物HBV RT區(qū)TA克隆測(cè)序及其基因型分析34-37
• 2.4 定點(diǎn)突變結(jié)果37-38
• 2.5 重組載體質(zhì)粒酶切鑒定及測(cè)序鑒定38-39
• 2.6 各變異病毒株復(fù)制力水平及其表型耐藥特點(diǎn)分析39-43
• 3 討論43-47
• 4 結(jié)論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 綜述 乙型肝炎病毒阿德福韋酯耐藥相關(guān)變異的研究進(jìn)展54-71
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄71-72
• 致謝72-74

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 李浚明;體細(xì)胞無(wú)性系及其變異[J];遺傳;1983年01期

2 宋樹(shù)奎;胡開(kāi)元;胡多祿;;6株BALB/c系小鼠珠蛋白細(xì)微結(jié)構(gòu)分析及其與基因變異類型的關(guān)系[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1992年02期

3 陸挺;衛(wèi)俊智;朱鳳綏;謝立青;張崇浩;陳如意;丁曉紀(jì);錢亞宏;邢鐘琪;;離子注入引起植物變異的研究[J];北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1991年04期

4 萬(wàn)賢國(guó);龐伯良;;水稻激光誘變譜的初步觀察[J];應(yīng)用激光;1981年03期

5 萬(wàn)東輝,葉士t，

本文編號(hào)：270545