【摘要】：本文通過(guò)高效液相離子交換色譜(HPIELC)和激光光散射儀聯(lián)用的分離－檢測(cè)系統(tǒng)研究腸致瀉性大腸桿菌的色譜行為，旨在發(fā)展一種能適用于臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查的快速分離、檢測(cè)和鑒定致病菌的新方法。 文中首先對(duì)色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定對(duì)腸致瀉性大腸桿菌表征的最佳色譜條件和檢測(cè)方法。在此條件下，腸致病性大腸桿菌(EPEC)和腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)有其各自的特征性圖譜：EPEC的各主要血清型菌種(除E.coli O125:H-外)均表現(xiàn)為一個(gè)穿透峰和一個(gè)洗脫單峰、洗脫峰保留時(shí)間介于16min－19min；EIEC的各主要血清型菌種均只表現(xiàn)為一個(gè)尖銳而對(duì)稱的洗脫峰，色譜保留時(shí)間介于22min－25min。 接著從兩個(gè)方面探討了造成EPEC和EIEC色譜行為不同的原因。1.通過(guò)靜態(tài)、動(dòng)態(tài)的吸附實(shí)驗(yàn)，比較了離子交換樹脂對(duì)EPEC和EIEC的吸附容量，排除了EPEC的穿透峰是由樹脂對(duì)細(xì)菌吸附過(guò)飽和引起的可能性；收集EPEC穿透峰、洗脫峰的菌樣進(jìn)行顯微鏡鏡檢、菌峰再培養(yǎng)后的重色譜表征、生化藥敏實(shí)驗(yàn)、透射電子顯微鏡觀察、去除菌體鞭毛后的色譜表征等實(shí)驗(yàn)證實(shí)了EPEC的穿透峰是由鞭毛引起的。2.通過(guò)對(duì)EPEC、EIEC菌體的全細(xì)胞脂多糖SDS-PAGE電泳分析和測(cè)定EIEC、去除鞭毛后EPEC的疏水性實(shí)驗(yàn)表明：EPEC和EIEC洗脫峰保留時(shí)間的差異是由脂多糖通過(guò)影響菌體與樹脂間的靜電作用和疏水作用造成的。 對(duì)各種不具有鞭毛的志賀氏菌進(jìn)行色譜表征，均未發(fā)現(xiàn)穿透峰。這進(jìn)一步驗(yàn)證了穿透峰是由鞭毛引起的。同時(shí)志賀氏菌缺失O－多糖鏈后保留時(shí)間延長(zhǎng)，其中宋內(nèi)氏志賀氏菌遲5min左右、福氏志賀氏菌2a型遲3min左右，進(jìn)一步表明脂多糖是影響細(xì)菌色譜行為的關(guān)鍵因素。 將10株經(jīng)生化、血清學(xué)試驗(yàn)鑒定均為O157大腸桿菌的菌株進(jìn)行色譜表征，與標(biāo)準(zhǔn)株的色譜圖對(duì)照，發(fā)現(xiàn)其中編號(hào)為PC029和NS283的菌株表現(xiàn)出異常的色譜行為。經(jīng)PCR驗(yàn)證，結(jié)果表明這兩株并非O157大腸桿菌。 實(shí)驗(yàn)表明，EPEC、EIEC、E.coli O157:H7、志賀氏菌有其各自的色譜特征圖譜，鑒于此，本研究成功地分離了EPEC和EIEC的混合樣品以及EIEC和志賀氏菌的混合樣品。 以上結(jié)果表明，HPIELC可作為“指紋圖譜”應(yīng)用于細(xì)菌的分類鑒定、分離純化，而且為判斷細(xì)菌動(dòng)力、抗原變異提供一種快速、靈敏、適用的新手段。
【圖文】：

圖 1-1 FCM 主要原理示意圖胞術(shù)的主要原理如圖 1-1 所示。簡(jiǎn)要的說(shuō)，即制備合中的細(xì)胞以很高的流速通過(guò)光照區(qū)，其產(chǎn)生的光學(xué)或接受，并測(cè)得細(xì)胞或亞細(xì)胞成分的重要生物學(xué)性質(zhì)，的信號(hào)被定量分析[8-9]。胞術(shù)與其它細(xì)胞分析技術(shù)相比具有如下特點(diǎn)：1.高速5000 個(gè)細(xì)胞；2.高靈敏度，每個(gè)細(xì)胞只要帶有 1000～出，兩個(gè)細(xì)胞之間有 5％的差別就可區(qū)別出來(lái)，光散精度，在細(xì)胞懸液中測(cè)量細(xì)胞，比其它分析技術(shù)的變；4.高純度，分選細(xì)胞的純度可達(dá) 99％以上；5.多參定量檢測(cè) DNA、RNA 等多個(gè)參量；6.在適當(dāng)?shù)臈l件下，分析和分選。代初期，，F(xiàn)CM 在動(dòng)物細(xì)胞的應(yīng)用研究發(fā)展迅速，但礙在微生物學(xué)領(lǐng)域取得進(jìn)展。直到 1979 年，Steen 小組

遞鏈后的細(xì)菌進(jìn)行了表征。2000 年以來(lái)，以 Arm把高效毛細(xì)管電泳引入到微生物分離的應(yīng)用領(lǐng)域的病原菌，快速分析消費(fèi)商品中的微生物組成以活率[33-34]。這些研究都表明，對(duì)于細(xì)菌的研究毛效的分析手段，也進(jìn)一步說(shuō)明了不同微生物在表泳法的分離模式有限，不能根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞的多種更重要的是毛細(xì)管電泳法難以篩選和回收用于進(jìn)的細(xì)菌活細(xì)胞。離技術(shù)化性是細(xì)菌對(duì)化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)，具有這種趨化性度下得到分離，然而對(duì)于運(yùn)動(dòng)型非趨化性細(xì)菌的(Field-flow fractionation，F(xiàn)FF)可有效解決這
【學(xué)位授予單位】：福州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2683066