本文關(guān)鍵詞：TRPV1與pJNK在RTX致痛模型大鼠脊髓背角的表達(dá)變化及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的:帶狀皰疹后神經(jīng)痛(Postherpetic neuralgia,PHN)是一種令患者絕望的疾病,是罹患帶狀皰疹(Herpes zoster,HZ)后最常見的并發(fā)癥,被普遍認(rèn)為是一種神經(jīng)病理性痛的綜合癥[1,30]。在北美、歐洲及亞非地區(qū),每年每千人中就有4至4.5個新增的HZ病例[5]。在如此龐大基數(shù)的HZ患者中,10%至20%將發(fā)展成為PHN患者[30]。其臨床癥狀主要是在之前皰疹所波及的皮節(jié)區(qū)范圍內(nèi)發(fā)生的自發(fā)性疼痛、痛覺過敏和感覺遲鈍等,大多數(shù)人的癥狀會持續(xù)3個月至1年,更有甚者可持續(xù)數(shù)年。PHN患者的生活質(zhì)量及工作受到嚴(yán)重的影響,癥狀較重者常導(dǎo)致抑郁甚或自殺傾向,為家庭和社會增添了沉重的經(jīng)濟(jì)、精神負(fù)擔(dān)[25,30,35]。目前主要是通過藥物進(jìn)行對癥治療,但各類藥物均無法長期有效的改善癥狀,并且不可避免的帶來了藥物副作用[4,5,25,35,47,59]。因此,要研發(fā)出更有效的治療手段及藥物,我們首先要搞清楚PHN的確切病因及其背后的發(fā)病機(jī)制。PHN的主要發(fā)病原因可能是潛伏于患者顱神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)以及整個神經(jīng)軸上的自主神經(jīng)節(jié)內(nèi)的帶狀皰疹病毒再次激活而產(chǎn)生的相應(yīng)復(fù)雜的級聯(lián)反應(yīng)所導(dǎo)致的[1,5,8,10]。有學(xué)者于1990年首次成功將帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)導(dǎo)入成年大鼠體內(nèi),且病毒能夠長期潛伏感染于大鼠周圍神經(jīng)系統(tǒng)中。并由此成功構(gòu)建了PHN模型大鼠,該模型逐漸成熟并大為推廣[30,42,87]。然而,該模型的構(gòu)建難度大,成功率低,常以失敗結(jié)局,包括VZV培養(yǎng)條件苛刻,熱痛閾異常狀態(tài)誘導(dǎo)困難,局部組織炎癥狀態(tài),局部皮損嚴(yán)重甚至是vzv擴(kuò)散至中樞神經(jīng)系統(tǒng)后導(dǎo)致的大鼠癱瘓等等[44,67,86]。也許正是因?yàn)槟Ｐ蜆?gòu)建難以達(dá)標(biāo),因此phn發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展才緩慢不前。學(xué)者h(yuǎn)ui-linpan等人于2003年意外發(fā)現(xiàn)樹酯毒素(resiniferatoxin,rtx)作用于成年大鼠后能夠使其產(chǎn)生機(jī)械痛閾及熱痛閾的雙相變化,這種痛閾的雙相變化與phn患者的臨床表現(xiàn)十分相似[68]。目前,越來越多的學(xué)者接受這種動物模型,認(rèn)為該模型穩(wěn)定、易獲取并且更貼切的模仿了phn病人的臨床表現(xiàn),從癥狀學(xué)角度可以認(rèn)為其是一種穩(wěn)定的非病毒誘導(dǎo)的phn模型,是探索神經(jīng)病理性痛發(fā)病機(jī)制的有力模型[44,67-70]。trpv1受體是一種非選擇性鈉/鈣離子通道,首次被caterinaetal.克隆并被描述為“溫?zé)岣惺芷骷盁醾鞲衅鳌?主要表達(dá)在傷害性傳入神經(jīng)纖維(c類纖維)上。而rtx是辣椒素(capsaicin)的超能類似物,可激活辣椒素受體(trpv1)[62-64]。因此,我們認(rèn)為trpv1可能參與調(diào)節(jié)rtx致痛模型大鼠痛閾的變化。另外,大量研究證實(shí),mapk家族在神經(jīng)病理性痛的誘導(dǎo)和維持方面具有不可忽視的重要性。神經(jīng)病理性痛模型如脊神經(jīng)結(jié)扎模型及坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型中,pjnk于脊髓背角的星型細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)特定時間點(diǎn)的高表達(dá)狀態(tài)[76]。我們推斷jnk可能亦參與調(diào)節(jié)rtx致痛模型大鼠痛閾的變化。綜上,我們認(rèn)為脊髓trpv1及jnk可能參與調(diào)節(jié)phn痛閾變化的過程。通過本實(shí)驗(yàn)我們可以進(jìn)一步印證rtx致痛模型是一種可靠的、穩(wěn)定的phn模型。再者,對于了解phn發(fā)病機(jī)制及治療策略可能提供新的理論依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)首先通過在成年sd(sprague-dawley)大鼠腹腔內(nèi)注射rtx建立phn模型大鼠。通過多時間點(diǎn)的行為學(xué)檢測方法,以明確模型大鼠的機(jī)械痛閾及熱痛閾的變化規(guī)律,進(jìn)而對本疼痛模型的構(gòu)建成功與否進(jìn)行評估,以確定phn大鼠模型的成功建立及穩(wěn)定維持;分別依據(jù)熱痛閾及機(jī)械痛閾的時間變化特點(diǎn),選擇合適的時間點(diǎn)通過westernblot測定脊髓trpv1和jnk的表達(dá)水平。此后分別根據(jù)熱痛閾及機(jī)械痛閾的變化規(guī)律,選擇適宜的時間點(diǎn)分別進(jìn)行鞘內(nèi)注射trpv1或jnk的敏感抑制劑,之后再次通過行為學(xué)檢測方法觀察相應(yīng)抑制劑作用后模型大鼠的熱痛閾及機(jī)械痛閾的變化規(guī)律、同時通過westernblot測定脊髓trpv1和jnk的表達(dá)水平是否在特定的時間點(diǎn)經(jīng)鞘內(nèi)給藥后發(fā)生變化。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:rtx致痛模型大鼠的構(gòu)建及評價(1)將rtx溶解于新鮮配制的10%吐溫80、10%乙醇和80%的生理鹽水混合液中,制成后濃度為40ug/ml。按200ug/kg濃度的rtx進(jìn)行腹腔注射構(gòu)建大鼠phn模型。在rtx處理前2d,處理后5周內(nèi)每隔3d進(jìn)行痛行為學(xué)檢測,發(fā)現(xiàn)rtx處理1d后,大鼠出現(xiàn)明顯的熱痛閾(thermalwithdrawallatency,twl)升高,2d后twl升高到最大值(26.0±1.2s),持續(xù)大于5周。而sham組的twl無明顯變化(p0.05)。rtx處理10d后,大鼠有明顯的機(jī)械痛閾(pawwithdrawalthreshold,pwt)降低,2周時pwt降低至最小值(5.2±1.3g),持續(xù)超過5周。而sham組的pwt無明顯變化(p0.05)。這提示從行為學(xué)角度來說rtx構(gòu)建的phn模型已基本成功。(2)依據(jù)模型大鼠twl及pwt的變化特點(diǎn),選擇合適時間點(diǎn)在冰上快速取出大鼠脊髓腰膨大段,完善處理后,通過westernblot測定脊髓trpv1和jnk的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)與sham組相比,rtx處理后1d脊髓背角trpv1表達(dá)減少,2d達(dá)最低值,并持續(xù)5周左右(p0.05)。與sham組相比,rtx處理后10d脊髓背角p-jnk表達(dá)升高,2周達(dá)最大值,并持續(xù)5周左右(p0.05)。綜上可知trpv1與pjnk在大鼠脊髓背角的表達(dá)變化分別與twl及pwt的變化規(guī)律在時間窗上基本一致。實(shí)驗(yàn)二:鞘內(nèi)分別注射trpv1與pjnk的抑制劑可影響模型大鼠痛閾的改變及脊髓trpv1與pjnk的表達(dá)變化(1)選擇適宜時間點(diǎn):由實(shí)驗(yàn)一可發(fā)現(xiàn)模型大鼠的twl在2d時升高至最大值,同時發(fā)現(xiàn)脊髓背角的trpv1是在2d時表達(dá)量最低。同理,發(fā)現(xiàn)2周時模型大鼠的pwt降至最低值且jnk的表達(dá)量最高。這基本表明rtx處理后2d時模型大鼠的熱觸覺遲鈍(熱痛閾升高)已穩(wěn)定形成,2周時機(jī)械痛敏(機(jī)械痛閾降低)已穩(wěn)定形成。(2)在rtx處理前0.5h和處理后2d時分別經(jīng)鞘內(nèi)注射trpv1的敏感抑制劑capsazepine(50nmol),發(fā)現(xiàn)預(yù)先(rtx處理前0.5h)鞘內(nèi)給予capsazepine(50nmol)后可明顯改善rtx誘發(fā)的熱觸覺遲鈍(熱痛閾升高),twl降低明顯(p0.05)。然而,當(dāng)rtx誘發(fā)的熱痛閾升高持續(xù)存在時(2d)再給予上述capsazepine(50nmol)鞘內(nèi)治療,則不能有效改善熱痛閾升高。同理,在rtx處理前0.5h和處理后2周時分別經(jīng)鞘內(nèi)注射jnk的敏感抑制劑sp600125(50nmol),發(fā)現(xiàn)在rtx誘導(dǎo)的機(jī)械痛敏(機(jī)械痛閾降低)持續(xù)存在時(2周)鞘內(nèi)給予sp600125(50nmol)后2~6h內(nèi)可明顯改善rtx誘發(fā)的機(jī)械痛敏(機(jī)械痛閾降低),pwt明顯升高(p0.05)。然而,預(yù)先(rtx處理前0.5h)鞘內(nèi)給予sp600125(50nmol),則不能有效緩解機(jī)械痛敏(fig.3b)。這從行為學(xué)角度說明,trpv1可能參與rtx模型的熱痛閾升高的發(fā)生階段,而非維持階段;jnk可能參與rtx模型的機(jī)械痛閾降低的維持階段,而非發(fā)生階段。(3)根據(jù)上述trpv1及jnk抑制劑鞘內(nèi)注射的時間點(diǎn),分別選取合適的時間點(diǎn)在冰上快速取出大鼠腰膨大段脊髓,完善處理后,通過westernblot測定脊髓trpv1和jnk的表達(dá)。觀察到預(yù)先(rtx處理前0.5h)鞘內(nèi)給予capsazepine(50nmol)后trpv1表達(dá)上調(diào),然而rtx處理2d時鞘內(nèi)給予上述capsazepine(50nmol)后trpv1表達(dá)無明顯變化(p0.05);發(fā)現(xiàn)rtx處理2周時鞘內(nèi)給予sp600125(50nmol)后p-jnk表達(dá)下調(diào),而預(yù)先(rtx處理前0.5h)鞘內(nèi)給予上述sp600125(50nmol)后p-jnk表達(dá)無明顯變化(fig.4d;p0.05)。從脊髓蛋白角度,再次說明trpv1可能參與rtx模型的熱痛閾升高的發(fā)生階段,而非維持階段;jnk可能參與rtx模型的機(jī)械痛閾降低的維持階段,而非發(fā)生階段。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)主要的創(chuàng)新之處在于驗(yàn)證了rtx致痛模型大鼠可以穩(wěn)定的模仿臨床phn病人的癥狀。進(jìn)一步印證rtx致痛動物模型是一種可靠的、穩(wěn)定的phn模型。同時通過合適的時間點(diǎn)經(jīng)鞘內(nèi)給予相應(yīng)抑制劑,發(fā)現(xiàn)脊髓trpv1與jnk分別參與rtx致痛模型大鼠的痛閾改變,提示trpv1與jnk可能參與phn患者痛閾變化的調(diào)節(jié)。(1)rtx處理成年sd大鼠后,可在一定時間后分別可產(chǎn)生明確的熱痛閾及機(jī)械痛閾的變化,并且這種雙相的痛閾改變可在較長時間內(nèi)維持穩(wěn)定。rtx致痛模型能夠準(zhǔn)確的模仿phn病人的臨床表現(xiàn),可認(rèn)為是一種可靠的、穩(wěn)定的phn動物模型。從側(cè)面反映本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建rtx誘導(dǎo)的非病毒phn模型,并為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了良好的基礎(chǔ)。(2)rtx致痛模型大鼠脊髓trpv1與jnk的表達(dá)變化分別與熱痛閾及機(jī)械痛閾的變化規(guī)律在時間窗上基本一致。提示脊髓trpv1與jnk可能參與phn病人痛閾變化的調(diào)節(jié):trpv1參與調(diào)節(jié)熱痛閾,jnk參與調(diào)節(jié)機(jī)械痛閾。(3)不同時間點(diǎn)經(jīng)鞘內(nèi)分別給予相應(yīng)抑制劑后,從行為學(xué)層面和脊髓蛋白層面均發(fā)現(xiàn)RTX致痛模型大鼠脊髓TRPV1可能參與調(diào)節(jié)其熱痛閾升高的發(fā)生階段而非維持階段;脊髓JNK可能參與調(diào)節(jié)其機(jī)械痛閾降低的維持階段而非發(fā)生階段。以上提示對于PHN患者發(fā)生熱觸覺遲鈍(熱痛閾升高)時,若能夠在早期及時鞘內(nèi)給予TRPV1抑制劑可能存在較好緩解效果;同理,PHN患者發(fā)生機(jī)械痛敏(機(jī)械痛閾降低)時,若能夠在其維持期鞘內(nèi)給予JNK抑制劑可能存在較好鎮(zhèn)痛效果。
【關(guān)鍵詞】：疼痛 脊髓 辣椒素受體 氨基端激酶 樹酯毒素
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R752.12;R-332
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-25
• 實(shí)驗(yàn)一RTX致痛模型大鼠的構(gòu)建及評估25-41
• 1 材料25-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-35
• 3 結(jié)果35-37
• 4 討論37-41
• 實(shí)驗(yàn)二 鞘內(nèi)分別注射TRPV1與pJNK的抑制劑可影響模型大鼠痛閾改變及脊髓TRPV1與pJNK的表達(dá)變化41-57
• 1 材料41-45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45-51
• 3 結(jié)果51-53
• 4 討論53-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 個人簡歷和研究成果66-67
• 致謝67

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營養(yǎng)學(xué)報(bào);1957年04期

2 陳偉強(qiáng);趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);2001年03期

6 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國血液流變學(xué)雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長斌;+Gz暴露時間對大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

8 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡易的大鼠保定方法[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);2004年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：263356