發(fā)布時(shí)間：2017-03-23 00:17

  本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)幼鼠食物過敏模型免疫干預(yù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的1.以Balb/c小鼠脂肪組織體外分離脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose Derived Stem Cells,ADSC)并做鑒定及培養(yǎng);2.構(gòu)建卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致Balb/c幼鼠食物過敏模型,并利用Luminex液相芯片技術(shù)檢測(cè)其血清細(xì)胞因子表達(dá);3.探討在致敏前期和致敏后期脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞注射移植對(duì)Balb/c幼鼠食物過敏的免疫干預(yù)作用,并比較兩組的療效有何不同。方法取無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級(jí)別6周齡的Balb/c品系雄性小鼠,采用頸椎脫臼的方法處死小鼠,于超凈工作臺(tái)中無菌取小鼠附睪及其周圍部位的脂肪組織,使用眼科剪將其剪成小碎塊,然后加入Ⅰ型膠原酶消化,經(jīng)過濾去除未消化組織,離心后接種,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng),3-4代后得到純度較高的ADSC,進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化鑒定及CD44、CD29的表面抗體鑒定,鑒定后凍存以備移植使用。將32只3周齡Balb/c雌性小鼠隨機(jī)分為4個(gè)組:空白對(duì)照組、過敏模型組,ADSC治療組,ADSC預(yù)防組,每組8只。利用卵清蛋白(OVA)建立Balb/c幼鼠食物過敏動(dòng)物模型,空白對(duì)照組給予等量生理鹽水作為對(duì)照,ADSC治療組在強(qiáng)化致敏后(即造模第15天)按每只小鼠給予1×106個(gè)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行細(xì)胞移植,ADSC預(yù)防組在第一次基礎(chǔ)致敏時(shí)(即造模第1天)進(jìn)行細(xì)胞移植,空白對(duì)照組及過敏模型組給予等量PBS作為對(duì)照。觀察各組小鼠相關(guān)的癥狀并進(jìn)行評(píng)分,最后一次激發(fā)致敏操作后處死小鼠,取空腸組織0.5cm做HE染色,觀察不同分組小鼠病理有何改變,小鼠處死前摘眼球取血,利用Luminex技術(shù)檢測(cè)血清中多種細(xì)胞因子的變化情況,檢測(cè)小鼠食物過敏血清細(xì)胞因子表達(dá)情況,并比較ADSC治療組及ADSC預(yù)防組的不同。結(jié)果1.體外成功分離了Balb/c小鼠的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)約2周可出現(xiàn)脂肪滴,經(jīng)過油紅O染色可呈現(xiàn)紅色;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)3周左右可出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié),經(jīng)過茜素紅染色可呈現(xiàn)紅色;ADSC陽(yáng)性表達(dá)CD44(98.92%)、CD29(99.78%)。2.制備Balb/c幼鼠食物過敏模型。與空白對(duì)照組的小鼠相比,過敏模型組小鼠表現(xiàn)出比較顯著的過敏癥狀和體征,過敏模型組小鼠的癥狀評(píng)分平均值(3.13±0.64)明顯高于空白對(duì)照組(0.38±0.52)(P0.05);病理切片出現(xiàn)小腸絨毛水腫,大量淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn),并且IFN-γ,作為血清中Th1特征性代表因子,其含量是降低的(P0.05);IL-4,作為Th2特征性代表因子,其含量是升高的(P0.05);過敏模型組其它細(xì)胞因子IL-5、IL-6、IL-17A、IL-22、IL-23、MCP-1與對(duì)照組相比含量均升高,變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而IL-10、IL-13的含量與空白對(duì)照組對(duì)比也有所升高,但并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.與過敏模型組相比,ADSC治療組過敏癥狀評(píng)分平均值明顯降低(P0.05);病理切片腸絨毛相對(duì)完整,炎細(xì)胞浸潤(rùn)量較少,ADSC治療組IFN-γ、IL-4含量變化也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中ADSC治療組的IFN-γ含量是升高的,IL-4的含量是降低的;其它細(xì)胞因子IL-5、IL-6、IL-17A、IL-22、IL-23、MCP-1含量降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而IL-10、IL-13含量變化同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明ADSC移植對(duì)幼鼠食物過敏具有免疫調(diào)節(jié)作用。4.ADSC預(yù)防組過敏癥狀評(píng)分較過敏模型組分低(P0.05),但高于ADSC治療組;病理切片觀察較過敏組有緩解,細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-22、IL-23含量升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余指標(biāo)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明ADSC治療組、ADSC預(yù)防組都能改善小鼠過敏癥狀,而ADSC治療組較ADSC預(yù)防組效果更好。結(jié)論1.以小鼠脂肪組織體外可以成功制備、分離培養(yǎng)ADSC;2.OVA可以建立3周齡Balb/c幼鼠食物過敏模型;3.在致敏前期或致敏后期進(jìn)行ADSC移植對(duì)Balb/c幼鼠食物過敏均有免疫干預(yù)作用,可以降低食物過敏幼鼠的過敏癥狀評(píng)分,減輕腸粘膜過敏病理?yè)p傷程度,調(diào)高Th1細(xì)胞因子IFN-γ,調(diào)低Th2細(xì)胞因子IL-4等,對(duì)食物過敏幼鼠有免疫防治作用,致敏后期干細(xì)胞移植比致敏前期移植免疫調(diào)節(jié)效果更好。4.腹腔移植ADSC可以減輕OVA誘導(dǎo)的幼鼠食物過敏,其機(jī)制可能與ADSC對(duì)Th1、Th2、Th17、Th22的免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：食物過敏 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 調(diào)節(jié)作用 卵清蛋白 幼鼠
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.9;R-332
【目錄】：

• 英文縮略詞對(duì)照6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 1 引言13-16
• 2 材料與方法16-26
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16-17
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.1.4 主要試劑配制19-20
• 2.2 方法20-26
• 2.2.1 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSC）的分離培養(yǎng)與鑒定20-23
• 2.2.2 卵清蛋白（OVA）制備Balb/c幼鼠食物過敏模型23-24
• 2.2.3 ADSC移植到食物過敏模型幼鼠體內(nèi)24
• 2.2.4 Balb/c幼鼠食物過敏癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)24
• 2.2.5 小鼠空腸取材、HE染色及組織學(xué)觀察24-25
• 2.2.6 小鼠取血并檢測(cè)血清細(xì)胞因子25-26
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理26
• 3 結(jié)果26-33
• 3.1 體外成功分離培養(yǎng)并鑒定ADSC26-28
• 3.1.1 小鼠ADSC的形態(tài)觀察26-27
• 3.1.2 小鼠ADSC的鑒定27-28
• 3.2 OVA成功制備Balb/c幼鼠食物過敏模型28-33
• 3.2.1 食物過敏癥狀評(píng)分28-30
• 3.2.2 小鼠空腸組織學(xué)觀察30-31
• 3.2.3 空白對(duì)照組和過敏模型組細(xì)胞因子含量檢測(cè)31-32
• 3.2.4 ADSC治療組和過敏模型組細(xì)胞因子含量檢測(cè)32
• 3.2.5 ADSC預(yù)防組和過敏模型組細(xì)胞因子含量檢測(cè)32-33
• 4 討論33-37
• 4.1 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSC）的分離培養(yǎng)與鑒定33-34
• 4.2 卵清蛋白（OVA）制備Balb/ c幼鼠食物過敏模型34-35
• 4.3 小鼠血清細(xì)胞因子的檢測(cè)35-37
• 5 結(jié)論37-38
• 6 參考文獻(xiàn)38-42
• 7 附錄42-43
• 8 致謝43-44
• 9 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)49-51

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;體內(nèi)抵抗食物過敏的分子[J];中國(guó)食品衛(wèi)生雜志;2007年06期

2 邵潔;;兒童食物過敏的診治進(jìn)展[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2008年09期

3 蘇林;;食物過敏致嚴(yán)重消化道癥狀病例報(bào)道1例[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2009年19期

4 ;2011《中國(guó)實(shí)用兒科雜志》紐康特杯嬰幼兒食物過敏診治優(yōu)秀病例征集大賽[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2011年01期

5 ;2011《中國(guó)實(shí)用兒科雜志》紐康特杯嬰幼兒食物過敏診治優(yōu)秀病例征集大賽[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2011年03期

6 胡燕;;重視開展兒童食物過敏研究[J];中國(guó)兒童保健雜志;2011年06期

7 曹軍皓;閻有功;;食物過敏的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年13期

8 賴春華;張泉山;謝廣清;龍曉玲;黃東明;付四毛;楊冰巖;;兒童食物過敏29例臨床特征分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年11期

9 ;2011《中國(guó)實(shí)用兒科雜志》“紐康特杯”嬰幼兒食物過敏診治優(yōu)秀病例征集大賽[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2011年08期

10 王洪蘭;;嬰兒食物過敏的原因及預(yù)防[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2011年28期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陶愛林;;食物過敏及食物過敏原性評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2010年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中歐變態(tài)反應(yīng)高峰論壇參會(huì)指南/論文匯編[C];2010年

2 李斐;黎海芪;;食物過敏的防治現(xiàn)狀[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)2004年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

3 黃敏;王小平;丘蓉;巫劍峰;李靖;;韶關(guān)農(nóng)村地區(qū)兒童食物過敏流行病學(xué)調(diào)查分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2010年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中歐變態(tài)反應(yīng)高峰論壇參會(huì)指南/論文匯編[C];2010年

4 陳靜;黎海芪;廖艷;趙泓;陳潔;;我國(guó)3城市0-1歲兒童食物過敏流行病學(xué)調(diào)查[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

5 邵明軍;劉傳合;沙莉;李志英;李碩;羅燕青;陳育智;;北京城區(qū)0～14歲兒童食物過敏患病率調(diào)查[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)兒科呼吸學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 趙泓;李中躍;饒艷霞;徐小芹;孫曉鶯;陳潔;;杭州市區(qū)0～3歲兒童食物過敏現(xiàn)狀調(diào)查[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

7 鐘燕;;益生菌在防治兒童食物過敏中的研究進(jìn)展[A];營(yíng)養(yǎng)健康新觀察（第三十九期）：腸道微生態(tài)與健康[C];2007年

8 趙冬梅;;兒童食物過敏的診斷、治療和預(yù)防[A];2013山東省兒童保健學(xué)術(shù)交流會(huì)資料匯編[C];2013年

9 陳君石;;食物過敏:一個(gè)值得關(guān)注的毒理學(xué)研究領(lǐng)域[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)毒理學(xué)大會(huì)論文摘要[C];2013年

10 夏兆飛;;犬食物過敏的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分冊(cè)）[C];2003年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉衛(wèi)宏 唐時(shí)奎;蛋奶易致兒童食物過敏[N];新華每日電訊;2002年

2 哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院皮膚科 郝濟(jì)學(xué);食物過敏可致命[N];河北科技報(bào);2010年

3 甘丘平;食物過敏應(yīng)從小預(yù)防[N];中國(guó)石油報(bào);2002年

4 北京大學(xué)第三醫(yī)院兒科副主任醫(yī)師 周薇;經(jīng)常腹瀉便秘 亦可能是食物過敏[N];健康報(bào);2012年

5 唐勇軍;謹(jǐn)防食物過敏[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

6 北京協(xié)和醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科 李宏;也談慢性食物過敏[N];健康報(bào);2007年

7 邵潔;小兒食物過敏問答[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

8 記者　 毛文波;別對(duì)食物過敏掉以輕心[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

9 劉云;如何確定對(duì)哪種食物過敏[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 瑞金醫(yī)院兒內(nèi)科醫(yī)師 吳群邋邵潔;小心兒童食物過敏[N];文匯報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 胡燕;兒童食物過敏的流行病學(xué)及發(fā)病機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃靖雯;不同遺傳背景嬰幼兒發(fā)生食物過敏的圍生期環(huán)境影響因素分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王有朝;壇紫菜R-藻藍(lán)蛋白的抗食物過敏性質(zhì)研究[D];集美大學(xué);2013年

3 來艷如;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)幼鼠食物過敏模型免疫干預(yù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

4 呂志玲;嬰兒食物過敏影響因素研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

5 王念蓉;嬰兒期食物過敏預(yù)后及食物過敏與腸道菌群關(guān)系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

6 陳靜;嬰幼兒食物過敏流行病學(xué)調(diào)查[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

7 趙泓;杭州市區(qū)0～3歲兒童食物過敏現(xiàn)狀調(diào)查[D];浙江大學(xué);2012年

8 陳妮妮;兒童食物過敏臨床分析及隨訪研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 梅少華;食物過敏患兒特異性抗體及細(xì)胞免疫因子變化特點(diǎn)及其氨基酸乳品聯(lián)合益生菌干預(yù)效應(yīng)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

10 趙新鳳;腸道菌群在食物過敏發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)幼鼠食物過敏模型免疫干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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