本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病相關(guān)三基因過表達小鼠模型研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：2型糖尿病是內(nèi)分泌代謝紊亂導(dǎo)致的以高血糖為主要特征的慢性疾病。在前臨床研究中動物模型應(yīng)用很普遍,可以模仿和再現(xiàn)2型糖尿病病理進程,可為藥物靶點篩選、新藥開發(fā)、高效治療方式的發(fā)現(xiàn)提供試驗對象。本研究構(gòu)建能在肝臟過表達11β-HSD1并在胰腺過表達CHOP和hIAPP的三基因整合過表達載體。采用顯微注射制備了轉(zhuǎn)三基因F0代、F1代小鼠,后期利用高脂高糖飲食誘導(dǎo)出了具有2型糖尿病相關(guān)表型的轉(zhuǎn)基因陽性C57BL/6小鼠成模。并結(jié)合個體生理生化指標(biāo)、組織學(xué)病理圖譜、基因表達調(diào)控相關(guān)分子生物學(xué)試驗等評價分析了此轉(zhuǎn)基因小鼠疾病模型。1)轉(zhuǎn)多基因小鼠制備及鑒定。構(gòu)建了三基因載體,制備并繁育了轉(zhuǎn)多基因小鼠F0、F1,并對其進行陽性鑒定,選取7周齡和33周齡陽性轉(zhuǎn)基因小鼠,熒光定量PCR檢測器官特異性表達。結(jié)果表明,PCR三條帶同時陽性時小鼠鑒定為轉(zhuǎn)基因陽性;與陰性對照相比,陽性小鼠組織過表達情況理想(幾倍甚至上百倍)。2)轉(zhuǎn)基因小鼠中外源基因拷貝數(shù)分析。熒光定量試驗得出了轉(zhuǎn)基因小鼠中三個家系個體三基因拷貝數(shù)值。F1代只有6號家系與11號家系11β-HSD1基因拷貝數(shù)沒有顯著差異(P=0.490.05),其余兩兩比較結(jié)果差異均顯著(P0.05)。全部陽性平均值為20.33±3.72(11β-HSD1)、7.13±1.41(CHOP)、3.76±1.10(hIAPP),反映了在小鼠上整合能力11β-HSD1CHOPhIAPP,F0代11號基因拷貝數(shù)為13.15(11β-HSD1)、3.51(CHOP)、0.70(hIAPP),11號家系F1代依次為27.29±3.1(11β-HSD1)、5.42±0.73(CHOP)、1.61±0.26(hIAPP)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),三個基因拷貝數(shù)不一致,大小趨勢不同小鼠個體間保持一致,代間保持一致拷貝數(shù),但F1代有大于F0代現(xiàn)象。3)高脂高糖誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠表型分析。對轉(zhuǎn)基因與野生對照小鼠進行了高脂高糖誘導(dǎo)試驗(雌雄各四個處理,Tg HF-HG,Ng HF-HG,Tg Control,Ng Control),誘導(dǎo)期間進行了表型數(shù)據(jù)監(jiān)測,定期進行糖耐量試驗與胰島素耐受試驗。結(jié)果表明:隨著誘導(dǎo)試驗的逐步進行高脂高糖轉(zhuǎn)基因雄性組增重顯著(p0.01),飲水量組間差異不明顯(p0.05);空腹血糖高脂高糖轉(zhuǎn)基因雄性組略高于其他組,但呈波動狀(190天,p0.05);高脂高糖轉(zhuǎn)基因雄性組糖耐量減低,與野生對照組相比,胰島素抵抗提前,從誘導(dǎo)2月就發(fā)生胰島素抵抗。繼續(xù)誘導(dǎo)表型加重(120天p0.01)。4)小鼠模型病理及分子生化分析。高脂高糖誘導(dǎo)處理組,心臟、脂肪等器官增重均大于對照料組(TgNc:p0.05);高脂高糖誘導(dǎo)處理,血清學(xué)結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因雄性組葡萄糖比對照組高,C肽含量降低說明胰島素分泌功能受損,還產(chǎn)生了高胰島素血癥、高酯血癥。HE切片展示了胰島的變化,高脂高糖轉(zhuǎn)基因組有的因為胰島素分泌代償而面積增大,少部分胰島已經(jīng)凋亡聚縮,高脂高糖野生對照組胰島則大部分是代償增大;免疫組化試驗,胰島大小與胰島素分泌情況與HE切片一致,hIAPP聚積和細胞凋亡情況測定分析,轉(zhuǎn)基因高脂高糖組胰島hIAPP聚積遍布胰島,凋亡因子Caspase 3表達增加。通過2A介導(dǎo)的多順反子載體制備肝臟11β-HSD1過表達,胰腺CHOP基因和hIAPP基因的過表達小鼠,加上高糖高脂飼料誘導(dǎo)作用,引起胰島素抵抗,胰島代償增加,產(chǎn)生明顯糖耐受低減,引起小鼠胰島β細胞啟動凋亡,導(dǎo)致胰島素分泌不足,本試驗大部分轉(zhuǎn)基因小鼠達到了具有向心肥胖、高胰島素血癥、糖耐量減低、胰島素抵抗、胰島代償增大或凋亡等特征的糖尿病前期階段。為將來制備轉(zhuǎn)基因豬模型做了鋪墊和預(yù)實驗。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)多基因 過表達 小鼠 肝臟 胰腺 糖尿病
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-13
• 英文縮略表13-14
• 第一章 引言14-22
• 1.1 糖尿病與其疾病動物模型14-16
• 1.1.1 糖尿病及其分類14-15
• 1.1.2 糖尿病小鼠模型15-16
• 1.2 糖尿病相關(guān)基因16-18
• 1.2.1 11β-HSD116-17
• 1.2.2 CHOP和h IAPP17-18
• 1.3 多順反子載體系統(tǒng)18
• 1.4 轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)18-19
• 1.5 研究現(xiàn)狀、目的和意義19-20
• 1.5.1 研究現(xiàn)狀19-20
• 1.5.2 研究目的20
• 1.5.3 研究意義20
• 1.6 本研究步驟與技術(shù)路線20-22
• 1.6.1 研究步驟20-21
• 1.6.2 技術(shù)路線21-22
• 第二章 轉(zhuǎn)多基因小鼠制備及鑒定22-29
• 2.1 材料與方法22-24
• 2.1.1 材料22
• 2.1.2 主要試劑和儀器22
• 2.1.3 方法22-24
• 2.2 結(jié)果與分析24-27
• 2.2.1 載體構(gòu)建24-25
• 2.2.2 轉(zhuǎn)基因小鼠制備及陽性鑒定25-26
• 2.2.3 轉(zhuǎn)基因小鼠器官特異性表達鑒定26-27
• 2.3 討論27-29
• 第三章 轉(zhuǎn)基因小鼠中外源基因拷貝數(shù)分析29-35
• 3.1 材料與方法29-30
• 3.1.1 材料29
• 3.1.2 主要試劑與儀器29
• 3.1.3 方法29-30
• 3.2 結(jié)果與分析30-33
• 3.2.1 梯度拷貝標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制30-32
• 3.2.2 三個家系F1代個體三基因拷貝數(shù)值32-33
• 3.3 討論33-35
• 第四章 高脂高糖誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠表型分析35-48
• 4.1 誘導(dǎo)試驗設(shè)計35-36
• 4.1.1 分組處理35-36
• 4.2 材料與方法36-37
• 4.2.1 材料36
• 4.2.2 主要試劑與儀器36
• 4.2.3 方法36-37
• 4.3 結(jié)果與分析37-46
• 4.3.1 體重與血糖測定37-39
• 4.3.2 飼料利用與飲水檢測39-41
• 4.3.3 糖耐量試驗與胰島素耐受試驗41-46
• 4.4 討論46-48
• 第五章 小鼠模型病理及生化分析48-56
• 5.1 材料與方法48-50
• 5.1.1 材料48
• 5.1.2 主要器材、試劑和儀器48
• 5.1.3 方法48-50
• 5.2 結(jié)果與分析50-54
• 5.2.1 血清學(xué)分析50
• 5.2.2 器官解剖分析50-52
• 5.2.3 功能蛋白表達分析52-53
• 5.2.4 病理切片HE及免疫組化分析53-54
• 5.3 討論54-56
• 第六章 全文結(jié)論56-58
• 6.1 全文結(jié)論56
• 6.2 創(chuàng)新點56
• 6.3 本研究不足56-58
• 參考文獻58-64
• 附錄64-68
• 附錄1 三基因載體主要序列64-67
• 附錄2 小鼠配種信息67-68
• 致謝68-70
• 作者簡歷70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 庾蕾;劉建平;莊志雄;楊淋清;張仁利;葉小明;程錦泉;;實時RT-PCR基因表達相對定量REST~洇軟件分析與2~((-ΔΔCT))法比較[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年10期

2 陳麗萌,李學(xué)旺,黃利偉,李艷,段琳,張小娟;2型糖尿病小鼠(KKA~y)動物模型的鑒定和早期腎臟病理改變[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2002年01期

  本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病相關(guān)三基因過表達小鼠模型研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：257575